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Caspase酶活化是细胞凋亡早期的一个显著特征，其参与蛋白质底物的切割及随后的细胞分解。我们提供一系列caspase检测，可检测活细胞中的活性caspase。
另请参见Caspase成像检测
流式细胞Caspase检测试剂选择指南
| 产品 | 检测的 Caspase | 激光(nm) | Ex/Em (nm) |
|---|---|---|---|
| CellEvent Caspase-3/7 Green 流式细胞检测试剂盒 | 3,7 | 488 | 511/533 |
| Vybrant FAM Poly Caspases 检测试剂盒 | All | 488 | 495/529 |
| Vybrant FAM Caspase-3 和 Caspase-7 检测试剂盒 | 3,7 | 488 | 495/529 |
| Vybrant FAM Caspase-8 检测试剂盒 | 8 | 488 | 495/529 |
CellEvent Caspase-3/7流式细胞检测可采用新型的荧光caspase-3/7检测试剂，流式检测凋亡细胞之中活化的 caspase-3和caspase-7 (图 1).
- Caspase-3/7特异性—包含活化的caspase-3和caspase-7的识别序列
- 易于区别—可轻松区分活、死和凋亡细胞群
- 快速分析—不需要洗涤和固定
- 兼容性强—适用于488 nm激发波长
CellEvent Caspase-3/7为细胞透过性检测试剂。该试剂包含与核酸结合染料偶联的四氨基酸多肽(DEVD)。细胞凋亡期间，caspase-3和caspase-7蛋白激活，可切割DEVD多肽之中的编码caspase 3/7识别序列。随着识别序列断裂及DNA结合，该试剂可采用明亮的荧光标记凋亡细胞，最大吸收/发射光谱~511/533 nm（绿色荧光检测试剂）。结合适当的SYTOX死细胞染色剂使用时，可轻松区分活细胞及坏死细胞。
图1：采用CellEvent Caspase-3/7 Green流式细胞术检测试剂盒在Attune流式细胞仪上检测Jurkat细胞 Caspase活性。 采用(A) DMSO 或 (B) 10 µM喜树碱将Jurkat细胞（人源T细胞白血病）处理三个小时后，再使用CellEvent Caspase 3/7 Green流式细胞检测试剂盒其进行标记。在配备488-nm激光器的Attune声波聚焦流式细胞仪上分析染色样品，分别采用530/30 BP滤光片CellEvent Caspase 3/7 Green 检测试剂和690/50BP滤光片（SYTOX AADvanced染色剂）收集发射荧光。注意：与对照组细胞群中的凋亡细胞基础水平（A图）相比，用喜树碱处理的细胞群中凋亡细胞的百分比更高（B图）。
Vybrant FAM Caspase检测试剂盒采用新型方法，基于caspases荧光抑制剂 (FLICA) 方法检测活细胞中的活性 caspases。Vybrant FAM Caspase检测试剂盒采用新型caspase抑制剂FLICA试剂，后者不可逆地与活性caspases之中的半胱氨酸共价结合，抑制酶的后续活性（图 2）.
该检测方法使用简单，无需专用缓冲液裂解或透化细胞膜 - 直接将试剂加入细胞培养基，孵育1-4小时，洗涤细胞，然后分析即可。
- 可以精确地检测活细胞中的活性caspase
- 比annexin V法更可靠
- 比TUNEL检测更简单
图2：采用Vybrant FAM Caspase检测试剂盒检测活性caspase。未结合的FLICA试剂扩散出细胞并被洗涤掉。绿色荧光信号可用于直接测定加入抑制剂时存在的活性caspase量。
图3：流式细胞术检测活细胞中的活性caspase。采用10 μM喜树碱处理在37ºC和5% CO2件下处理Jurkat细胞4小时，采用FLICA试剂（caspase-3 和 caspase-7）及碘化丙啶染色（两种成分均来自于 Vybrant FAM Caspase-3和 -7检测试剂盒）。在488 nm激发波长处，采用530 nm旁通和670 nm长通发射滤光片在流式细胞仪上分析样品。
资源
流式胞内染色示意小视频—细胞因子和核内靶点检测
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Panel Builder流式配色工具—这款简单、定制化的在线工具可助您轻松解决多色流式实验的配色难题。
5步法实验资源
不可转售。Super Bright聚合物染料由Becton, Dickinson and Company授权销售。