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利用流式细胞术进行免疫检查点研究
免疫检查点可调节免疫系统区分自我的能力。肿瘤细胞利用某些免疫检查点信号通路来抑制 T 细胞或 NK 细胞的活性，从而逃避正常的免疫监视。近年来将免疫检查点作为靶点的治疗方法可以提高肿瘤微环境中的免疫监视作用。
利用流式细胞术进行免疫细胞检查点研究。利用大量抗体和试剂盒，对表达炎症和免疫反应生物标志物的细胞进行定量分析。
工作原理：如何使肿瘤微环境中的免疫细胞失活
免疫检查点研究流式实验流程
免疫检查点信号通路中的已知靶点
抗体是一种检测细胞是否表达免疫检查点的工具。检测细胞表面受体和信号分子的相互作用，以了解细胞之间的相互作用。
| 免疫细胞 | 效应细胞 | 功能 |
|---|---|---|
| 细胞毒性 T 细胞相关抗原 4（CTLA-4） | T 细胞 | 肿瘤细胞使用 CTLA-4 通路来降低 T 细胞的活化增殖以及转化成记忆性 T 细胞的能力 |
| 程序性细胞死亡蛋白（PD-1） | T 细胞 | T 细胞上 PD-1 的表达表明细胞衰竭以及无免疫应答反应 |
| OX40 | T 细胞 | 激活 OX40 可刺激 T 细胞分化和溶细胞功能，从而可以增强抗肿瘤免疫反应 |
| 糖皮质激素诱导的 TNFR 相关蛋白（GITR） | T 细胞 | GITR 的活化可增强细胞增殖并产生抗肿瘤活性 |
| 吲哚胺-2,3-双加氧酶（IDO） | 调节性 T 细胞 | 肿瘤细胞可通过分解色氨酸对 IDO 活性进行上调，从而抑制 T 细胞功能 |
| CD73 | 调节性 T 细胞 | 肿瘤细胞利用 CD73 产生腺苷从而抑制 T 细胞活性 |
| 淋巴细胞活化基因（LAG） | T 细胞和调节性 T 细胞 | LAG 的表达可导致 T 细胞衰竭并抑制长期免疫应答 |
| CD137 | T 细胞和 NK 细胞 | CD137 可刺激 NK 细胞和 T 细胞的抗肿瘤免疫反应和免疫记忆 |
| SLAM 家族成员 7（SLAMF7） | NK 细胞 | SLAM7 的激活可刺激 NK 细胞和其他免疫细胞产生长期免疫反应 |
| 杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR） | NK 细胞 | 肿瘤细胞可通过表达 KIR 来逃避 NK 细胞 |
| 程序性细胞死亡蛋白配体（PD-L1） | 肿瘤细胞 | PD-L1 |
利用流式细胞术检测炎症反应
切碎器官或组织并进行酶解消化过夜
稀释样品
在 Attune NxT 流式细胞仪上进行免疫表型分析
免疫检查点抑制剂可以在包括肠或心脏在内的其他器官中诱导脱靶炎症反应。对来自器官和组织的粗制细胞悬液进行稀释，并利用 Attune NxT 流式细胞仪对数百万个细胞进行快速检测。寻找常见的炎性标志物，包括前列腺素、CXCL13 以及 IFN-γ。
利用流式细胞术检测T 细胞活性
免疫检查点抑制剂的作用是防止 T 细胞衰竭。通过检测肿瘤样品中细胞因子的产生来评估免疫细胞的功能。在发生炎症或宿主免疫防御时，T 细胞和 NK 细胞通过产生 γ干扰素 （IFN-γ）进行免疫应答。使用多参数流式细胞术对肿瘤样品中产生 IFN-γ 的 CD8 + 或 CD4 + T 细胞进行定量分析。
在CD4+ T 细胞和 NK 细胞亚群中 检测IFN-γ 的表达。刺激后的小鼠脾细胞检测细胞内IFN-γ（克隆 XMG1.2）的表达，只有少量CD4+ T 细胞和较大量 NK1.1+ 细胞）产生IFN-γ。使用 Attune NxT 流式细胞仪上机获取数据。