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alamarBlue 细胞活力检测试剂
alamarBlue HS和alamarBlue 细胞活力检测试剂是一种无毒的即用型刃天青指示剂，基于刃天青为基础溶液，该溶液可作为细胞健康指标，对细胞活力进行定量检测。alamarBlue 细胞活力检测试剂利用活细胞的还原能力将刃天青转化为荧光试卤灵。alamarBlue HS（高灵敏度）细胞活力检测试剂是alamarBlue的升级版，不仅保留了alamarBlue 细胞活力检测试剂的所有关键特性，还具有更高的灵敏度。
在进行长时细胞活力研究或处理高细胞密度时，建议使用alamarBlue HS和alamarBlue 细胞活力检测试剂。
alamar Blue细胞活力检测试剂选择指南
| alamarBlue HS （高灵敏度）细胞活力检测试剂 | alamarBlue 细胞活力检测试剂 | |
|---|---|---|
| 用途 |
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| 检测原理 |
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| 灵敏度 |  每孔检测至少 20 个细胞 |  每孔检测至少 50 个细胞 |
| 试剂纯度 |
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| 背景荧光 |
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| 信噪比 |
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| 检测信号窗口 |
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| 货号 | A50100 | DAL1025 |
在进行长时细胞活力研究或检测高细胞密度时，建议使用alamarBlue HS 细胞活力检测试剂，而在进行细胞活力快速测定（10 分钟孵育）时，建议使用PrestoBlue HS 细胞活力检测试剂。 | ||
什么是 alamar Blue 检测？
Alamar Blue细胞活力检测在细胞毒性和活力检测方面具有高度参考价值，已在生物和环境研究领域应用多年(1)。此外，细胞增殖和毒性分析是细胞健康评估和药物发现过程的一个关键环节。Alamar Blue是一种有效的细胞活力指示剂，利用活细胞的还原能力将刃天青转化为荧光试卤灵。可在基于吸光度或荧光的酶标仪上进行定量分析；而定性分析可通过新陈代谢活跃细胞的指示溶液的颜色变化进行视觉评估。
Alamar Blue的活性组分（刃天青）是一种无毒（图 1）的细胞渗透性化合物，颜色为蓝色，几乎无荧光。进入细胞后，刃天青被还原为试卤灵，产生亮红色荧光（图 2）。活细胞继续将刃天青转化为试卤灵，从而生成对细胞活力和细胞毒性的定量检测结果。
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图 1.alamarBlue HS 细胞活力检测试剂的无毒性证明。使用 alamarBlue HS 处理 U2OS 细胞 4 小时，对照组不处理。按照说明书，向两组中加入 CyQUANT Direct 试剂。CyQUANT Direct 荧光检测显示两组无显著差别，表明 alamarBlue HS 不是导致细胞毒性的主要因素。此外，当接触不同浓度的藤黄酸时，经过 alamarBlue HS 预处理的 U2OS 细胞显示出与对照细胞类似的 IC50 值。
图2.新陈代谢活跃的细胞将刃天青转化为一种可发出红色荧光的试卤灵。刃天青是一种无荧光指示染料，在新陈代谢活跃的细胞中通过化学还原转化成可发出亮红色荧光的试卤灵。产生的荧光量与活细胞的数量成正比。alamarBlue HS 中的刃天青经过纯化，其性能优于标准alamarBlue 细胞活力检测试剂，标准alamarBlue 细胞活力检测试剂因具有已知的污染问题，而导致性能次佳。
Alamar Blue 是细胞健康检测的优良试剂，由于无毒，可长期接触细胞而不产生负面影响；通过 CD44、CD45RB 和 CD4 抗原的流式细胞术分析，发现在有 alamar Blue 时生长的细胞产生的活细胞数量与对照细胞产生的活细胞数量相似。
alamarBlue HS 细胞活力检测试剂含有纯化的刃天青，不含任何会对试剂性能产生负面影响的污染性试卤灵。与标准alamarBlue 细胞活力检测试剂相比，alamarBlue HS 细胞活力检测试剂的背景信号减少了 >50%，信噪比增加了 >100%，同时保留了所有关键特性，使alamarBlue 细胞活力检测试剂成为具备高度参考价值的细胞活力和细胞毒性检测试剂。
如何使用alamarBlue 细胞活力检测试剂？
alamarBlue HS和alamarBlue 细胞活力检测试剂均为易于添加和读取的检测试剂（图 3）。只需在细胞中加入alamarBlue HS或alamarBlue细胞活力检测试剂，培养 1~4 小时，即可读取荧光或吸光度。荧光或吸光度与活细胞的数量成正比，与细胞的新陈代谢活动相对应。受损细胞或无活性细胞的代谢活动较低，因此产生的信号按比例低于健康细胞。
alamarBlue 细胞活力检测试剂与多个仪器平台兼容。样品经过 alamarBlue HS 或 alamarBlue 孵育后，即可在荧光和吸光度仪器仪表上进行检测。对于荧光检测，使用 560/590 nm（激发/发射）滤光片进行微孔板读数仪或荧光分光光度计检测。或者，在紫外-可见分光光度计上读取 570 nm 处 alamarBlue HS 和 alamarBlue 的吸光度。
最后，通过绘制荧光强度（或吸光度）与化合物浓度的关系图进行结果分析。荧光和吸光度的结果均呈现线性、可定量，其中荧光读数的灵敏度更高。
图 3.alamarBlue 检测的工作原理。
alamarBlue 检测不需要细胞裂解
alamarBlue HS 易于进入活细胞中，不需要通过固定和 DNA 变性技术来裂解或进一步处理细胞。该染料在细胞培养基（包括含酚红的培养基）中保持性质稳定。您可利用这些特性：
- 持续监测药物在剂量反应检测中或优化药物浓度时的效果
- 在使用 alamarBlue HS 或 alamarBlue 完成细胞活力检测后，进行其他功能检测
alamarBlue HS细胞活力检测试剂的表现更优
合成和生产过程导致所有基于刃天青的试剂均含有可检出的高荧光试卤灵污染。试卤灵的污染量因材料来源和生产条件的不同而具有很大差异。试卤灵含量的不同导致了可检出背景荧光的差异。此外，污染性试卤灵和由此导致的更高的背景信号，显著降低了检测的信噪比，减小了动态范围。
为了提高基于刃天青指示剂的性能，本公司开发出一种创新工艺，有效去除污染性试卤灵，生成纯化刃天青。这类纯化刃天青是多组分alamarBlue HS细胞活力检测试剂的标准配方。
alamarBlue HS 的灵敏度高于 alamarBlue
在alamarBlue HS细胞活力检测试剂中使用的纯化刃天青可将背景荧光减少>50%，信噪比增加>100%（图 4 和 图 5）
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图 4.将 alamarBlue HS 和 alamarBlue 进行比较时，可观察到背景荧光显著减少在alamarBlue HS 配方中使用纯化刃天青可降低细胞活力检测试剂在悬浮细胞 (Ramos)、原代细胞 (HCASMC) 和贴壁细胞 (U2OS) 中的背景荧光。
图 5.与 alamarBlue 相比，使用 alamarBlue HS 可提高信噪比性能。与标准 alamarBlue 配方相比，使用含有纯化刃天青的 alamarBlue HS 细胞活力检测试剂时，HCASMC（原代细胞）, Ramos（悬浮细胞）和 U2OS（贴壁细胞）显示出细胞活力信噪比增加。
alamarBlue HS 的检测窗口大于 alamarBlue
alamarBlue HS 可显示各种生物的长时细胞活力检测时间窗口，因此可用于各种人类和动物细胞系、细菌、植物和真菌，可对细胞活力和增殖进行定量检测（图 6）。
图 6.与标准 alamarBlue 配方相比，使用含有纯化刃天青的 alamarBlue HS 细胞活力检测试剂观察到的动态范围更大。在 A549 细胞中加入不同浓度的藤黄酸，检测细胞活力的变化。结果表明，使用 alamarBlue HS 时，显著增大了检测的动态范围。
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文献列表
相关资源
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荧光光谱查看器—可绘制和比较不同染料的荧光光谱，检查多个荧光基团的光谱兼容性。
应用资料
应用指南：PFOS 对 hESCs 分化为心肌细胞毒性作用的评估
应用指南：使用 Varioskan LUX 多功能酶标仪，利用 alamarBlue 和 PrestoBlue 试剂监测细胞健康
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