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Invitrogen TrueDesign 基因组编辑工具 是一个免费的在线工具，能够让不同经验水平的科学家轻松设计、选择和订购试剂，从而保证既准确又成功的基因编辑实验。
TrueDesign 基因组编辑工具支持的实验类型
基因编辑类型 | 敲除目标基因 | 敲入 GFP 或 RFP 标签 | 插入、删除或替换多达30个碱基 | SNP替换 |
描述 | 定点插入终止密码子或 indel 序列 | 不需要克隆就能标记目标基因 | 使用 CRISPR-Cas9 或 TALEN 技术在任何人、小鼠、大鼠、斑马鱼或线虫的基因中 | 将单核苷酸编辑引入目标基因中 |
| 用户指南 |
下载工作流程示意图
我们还提供 预设计的化学合成和慢病毒包装的向导RNA ，用于人类或小鼠目标基因的直接敲除，此外还可让您 在线轻松订购 我们的定制合成 sgRNA。
TrueDesign 还使您能够：
- 一键订购或导出设计
将所有实验试剂添加到购物车或下载一份完整报告 - 验证 CRISPR-Cas9 编辑
使用定制设计的引物进行测序或切割检测分析
TrueDesign工具支持六种类型的编辑—基因敲除、荧光标记、插入、替换、删除和 SNP 替换。每一个 gRNA 设计都附带了成功编辑所需的试剂清单，可以一起订购，便于完美配合使用。我们的研究表明，改进 gRNA、Cas9 核酸酶和供体 DNA 的设计和递送有助于提高 CRISPR/Cas9 介导的基因组编辑效率。[1]
操作视频
TrueDesign Genome Editor 软件工作流程
TrueDesign工具遵循一个简单的三步工作流程：选择您的基因和转录本，确定您的编辑类型，并根据我们的建议设计您的 CRISPR和/或TALEN 序列。最后，您会进入汇总页面，可以检查设计，下载所需的试剂清单并将它们添加到购物车中。
在这个例子中，我们将一个 GFP 标签添加到 ACTB 基因的 N 末端上。
- 样本数据
- 常见问题解答
- 版本说明
GFP 标记
该实验显示了把拓展工作流程 示例中的设计应用于 U2OS 细胞时的结果，编辑 ACTB 基因以生成 N 端和 C 端 带GFP 标签的肌动蛋白。使用推荐的 gRNA 序列 GCTATTCTCGCAGCTCACCA (PAM TGG)，正向和反向引物与 TrueTag 供体 DNA 试剂盒一起用于扩增供体模板。在成功扩增和纯化供体 DNA 后，将其与 gRNA 和 Cas9 蛋白共转染到细胞中。
显微镜图像显示了表达带 GFP 标签的 ACTB 的 U2OS 细胞（绿色），用 Hoechst 核染料复染（蓝色）。绿色肌动蛋白丝在成功编辑的细胞 (B) 和阴性对照 (A) 中清晰可见。当使用嘌呤霉素筛选被编辑的细胞时，通过流式细胞仪定量分析，GFP 阳性的细胞比例可高达近 100% 。详细工作流程参见TrueTag 供体 DNA 试剂盒用户指南。
ACTB 标记的细胞（绿色），用 Hoechst 染料复染（蓝色）。(A)阴性对照和(B)编辑过的细胞，能清晰显示出表达 GFP-ACTB 融合蛋白的肌动蛋白丝。(C)三个实验的总结，其中对于N-末端标签而言，应用嘌呤霉素可以筛选到>80%的 GFP 阳性细胞，而对于C-末端标签而言，可以筛选到>99%的阳性细胞。图像是在 Invitrogen EVOS FL 彩色成像系统上拍摄的。
使用入门
