dNTP、NTP 和修饰核苷酸

赛默飞世尔科技是该行业为数不多的核苷酸主要生产商之一。我们的核苷酸（包括 dNTP、NTP 和修饰核苷酸）采用高质量原材料在先进的生产设施中合成，可提供多种形式、制剂和体积，方便灵活。请查看以下适和您应用的产品，如 PCR、cDNA 合成、寡核苷酸合成和标记、体外转录等。

• 高纯度（>99%），经 HPLC 验证（图1）
• 不含 DNase、RNase 以及 qPCR、PCR 和 RT 抑制剂
• 在 -20°C 下可稳定保存3年
• 提供定制制剂和商业化供应

对于脱氧核糖核苷酸三磷酸 (dNTP)，从我们的单个产品目录中选择（dATP、dCTP、dGTP、dTTP 和 dUTP）。dNTP 可以每种单一溶液或所有四种混合物的形式提供。也可根据特定要求定制制剂。

所有核糖核苷酸三磷酸（NTP）制剂均设计为灵活易用。可提供 Tris 或钠盐形式的单个核苷酸（ATP、CTP、GTP 和 UTP），浓度最高200 mM。还提供定制制剂和核苷酸混合物。

表 1.dNTP 和 NTP 的参数

	dNTP	NTP
纯度 *	>99%	>99%
存在污染核苷酸、核苷和 PCR 抑制剂 *	未检出	未检出
DNase、RNase、内切和外切脱氧核糖核酸酶 **	未检出	未检出
存在人和大肠杆菌 DNA***	阴性	阴性
稳定性†	-20°C 下3年 >100次冻融循环	-20°C 下3年 >100次冻融循环
应用	qPCR、RT-qPCR PCR、RT-PCR、cDNA 合成 高保真长片段 PCR 等温扩增 DNA 标记 克隆 Sanger 测序和下一代测序（NGS）	体外转录 mRNA 合成 siRNA 合成 RNA 扩增 连接 磷酸化
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* 通过 HPLC（高效液相色谱）法测定
** 通过标记 DNA 或 RNA 靶标与 NTP 或 dNTP 孵育确认
*** Alu 重复序列或 23S rRNA 基因的 qPCR 检测
† 稳定性研究评估了 pH 值、HPLC 图谱和 PCR 性能。

高灵敏度诊断测定和治疗监管标准要求最高的核苷酸质量和批间一致性。我们经 ISO 13485 和 ISO 9001 认证的 dNTP 的有效期为三年，并在严格的多步骤 QC 和生产标准下生产，最大限度地减少最终产品的不一致和错误。在零废物场所使用专用设备制造，每个生产批次都按照最严格的纯度和功能性标准进行测定。对于可扩展、散装和灵活包装，请与我们的专家团队联系以获得定制解决方案。

纯度检测通过 HPLC（>99%）评估生产批次中的目标种类，并监测生产和纯化工艺过程中产生的核苷类副产物、残留化学物质或大分子污染物。我们使用多种方法来检测总体纯度，包括 HPLC、灵敏比色分析或 PCR 性能检测（表 5）。

表 5.核苷酸溶液的纯度评估。

我们生产三磷酸盐纯度大于99%的核苷酸，通过 HPLC 色谱进行评估（图 1.）。

微量核苷污染物可显著影响 PCR 性能。其中包括：

• 单磷酸和二磷酸形式，可减少核苷酸掺入
• 二脱氧碱基形式，可终止扩增反应
• 修饰核苷酸，可能降低测定灵敏度

在核苷酸生产或纯化过程中使用的残留化学物质会干扰 PCR，通常称为“PCR 抑制剂”。焦磷酸盐是生产过程中可能出现的残留污染物，在浓度为 0.1-0.3 mM 时，可通过干扰荧光检测来抑制实时 PCR [1]。使用孔雀石绿磷酸盐测定法可以便捷地监测无机焦磷酸盐的存在，这是一种检测孔雀石绿、钼酸盐和游离正磷酸盐之间复合物形成的比色方法。

大分子的存在可能会导致错误的检测结果。其中包括：

• DNase 和 RNase 污染物可能会影响 cDNA 合成，导致假阴性结果（图2）
• 核酸内切酶和蛋白酶活性可对扩增模板造成影响
• 人类和细菌来源的 DNA 污染可能导致假阳性结果

为了补充质量控制的分析检测，还使用各种功能检测（包括 RT-qPCR 和体外转录）对每批次 Thermo Scientific 核苷酸进行分析。

通过 RT-qPCR 对每个批次样品进行检测（图3）。该测定在低模板浓度下进行，从而能够检测 dNTP 性能的微小变化。

通过体外转录对每个批次样品进行检测（图4）。

您是否需要 Invitrogen dNTP 或 NTP 用于现有实验方案？请查看我们的 Invitrogen 核苷酸系列 ，查找您所需产品。

1. Ginzinger, D.G.2002 Gene quantification using real-time quantitative PCR: an emerging technology hits the mainstream.Experimental Hematology 30:503–512.