TaqMan® 蛋白定量是邻位连接技术 (PLA™) 的新形式 [1,2]，它将抗体-蛋白结合与通过实时荧光定量 PCR 检测报告核酸组合在一起。我们已对该技术进行了优化，以与天然细胞和组织裂解物配合使用，并采用 TaqMan® 检测试剂盒，以提供具有高灵敏度和特异性的工艺来测量小样本中的蛋白表达。

用于基于 TaqMan® 蛋白定量的研究有两种产品可供选择

  • 预设计的 TaqMan® 蛋白定量
    预设计的 TaqMan® 蛋白定量的开发是用于检测人胚胎干细胞中的 OCT3/4、NANOG、SOX2 和 LIN28 以及 ICAM1 和 CSTB，以测量人细胞的相对定量测定值。
  • 使用您抗体而定制的 TaqMan® 蛋白定量
    TaqMan® 蛋白定量开放试剂盒包含您需要的所有试剂（除了目标蛋白的抗体之外），用于构建您自己的 TaqMan® 蛋白定量。

从预设计的 TaqMan® 蛋白定量中选择

TaqMan® 蛋白定量使用金标准 TaqMan® 5-核酸酶检测化学试剂帮助定量测定蛋白表达，工作流程和样本量要求与我们的 TaqMan® 基因表达和 MicroRNA 检测试剂盒的要求相似。通过在同一个分析平台上获得蛋白表达结果，TaqMan® 检测试剂盒可直接建立 mRNA 和/或 miRNA 表达与蛋白表达的相关性。有 6 种即用型 TaqMan® 蛋白定量可供选择，用于人干细胞多能性蛋白以及常见人标记物胱抑素 B 和 ICAM1。

使用您的抗体构建 TaqMan® 蛋白定量

TaqMan® 蛋白定量开放试剂盒有助于构建 TaqMan® 蛋白定量。利用生物素化抗体快速轻松地构建针对您目标靶标的 TaqMan® 蛋白定量。可利用免疫原纯化多克隆抗体制备液（可分成两个池）或适合 ELISA 的匹配抗体对（通常由 1 个多克隆抗体和 1 个单克隆抗体组成）构建检测试剂盒。

TaqMan® 蛋白定量工作流程

工作流程阶段预设计的 TaqMan® 蛋白定量使用您抗体的 TaqMan® 蛋白定量
检测试剂盒制备NA使用针对目标蛋白的抗体来构建 TaqMan® 蛋白定量。将生物素化抗体连接至链霉亲和素的寡核苷酸“prox-oligos”以制备检测探针。
细胞/组织裂解在缓冲非离子型去污剂中使用温和的 1 步法程序裂解样本（细胞或组织），无需进一步的样本纯化或净化步骤。在缓冲非离子型去污剂中使用温和的 1 步法程序裂解样本（细胞），无需进一步的样本纯化或净化步骤。
结合检测探针是通过生物素-链霉亲和素键与寡核苷酸偶联在一起的靶标特异性抗体。探针对中的每个寡核苷酸代表 5′ 或 3′ 端，当检测探针上的抗体与靶蛋白上的两个不同的抗原决定簇相结合时，它们相互邻接。检测探针通过抗体/蛋白相互作用与靶蛋白上的 2 个不同抗原决定簇相结合。该技术将检测探针对上的寡核苷酸相互邻接。
连接/失活连接酶的底物是第三寡核苷酸杂交到检测探针对的寡核苷酸端而形成的桥接结构。当检测探针通过与靶蛋白结合而相互邻接时，会优先形成此结构。第三寡核苷酸杂交到检测探针对的寡核苷酸端形成桥接结构（使用 DNA 连接酶连接）反应后，蛋白酶处理使连接酶失活。
TaqMan® 快速实时荧光定量 PCR连接产物可在使用 TaqMan® 蛋白定量进行的实时荧光定量 PCR 中作为 DNA 模板。通过实时荧光定量 PCR 扩增和检测连接产物。
数据分析使用免费的 ProteinAssist™ 软件包分析 TaqMan® 蛋白定量数据。使用免费的 ProteinAssist™ 软件包分析 TaqMan® 蛋白定量数据

产品信息

Life Technologies 出版物

文献出版物

邻位连接技术参考文献

  1. Fredriksson S. and Landegren U. et al.(2002).利用邻位依赖性 DNA 连接技术进行蛋白检测。Nat. Biotechnol.20:473-477.
  2. Gullberg M., Landegren U., and Fredriksson S. et al., (2004) 通过基于抗体的邻位连接检测检测细胞因子.Proc Natl Acad Sci USA.101(22):8420-4.Epub 2004 May 21.