Search Thermo Fisher Scientific
Western Blot缓冲液
了解我们为蛋白印迹处理和检测的每个步骤专门配制的缓冲液。我们提供种类齐全的封闭液、漂洗缓冲液、去垢剂、抗体剥离液，以帮助您尽可能获得最理想的Western Blot数据。
探索我们种类齐全的Western Blot封闭液，帮助优化目标蛋白的检测
| 封闭液 | 封闭剂 | 产品优势 | 使用情形 | 可选类型 |
|---|---|---|---|---|
| 化学发光免疫印迹 | ||||
| StartingBlock 封闭液 | 不含血清和生物素的单一纯化蛋白 |
|
| PBS TBS PBST TBST |
| Blocker酪蛋白封闭液 | 纯化酪蛋白 |
|
| PBS TBS |
| Blocker BSA 封闭液 | 纯化牛血清白蛋白 |
|
| PBS TBS |
| 荧光蛋白免疫印迹 | ||||
| Blocker FL 荧光WB封闭液 | 单一纯化蛋白 |
|
| 10X 浓缩液 |
查看所有可选 western blot 封闭液。
在检测目标蛋白质之前，必须封闭膜的剩余结合表面，以防止抗体的非特异性结合。否则，抗体或其他检测试剂将与膜上最初用于固定目标蛋白的任何剩余位点结合。原则上，对靶标或检测系统组分不具有结合亲和力的任何蛋白质均可用于封闭。
多种封闭液（从牛奶或常规血清到高度纯化蛋白）可用于封闭膜上的自由位点。理想的封闭液将结合到可能发生非特异性相互作用的所有位点，以彻底消除背景，而不会改变或掩盖抗体结合的表位。但通常封闭液会影响抗体的结合和特异性，因此需要优化。没有任何一种蛋白质或蛋白质混合物能适合所有蛋白印迹实验，对于特定抗体、膜类型和底物系统的给定组合，必须进行经验测试才能获得最佳结果。
我们提供常用缓冲液（例如 PBS 和 TBS）的袋装预混干粉和瓶装浓缩液，用于蛋白印迹检测。
| TBS | PBS | TBST | PBST | |
|---|---|---|---|---|
| 预混干粉 | BupH Tris 缓冲液干粉包 （货号 28376 和 28379 - 40, 10 包） | BupH 磷酸盐缓冲液干粉包 （货号 28372- 40 包） | ||
| 浓缩液 | Pierce 20X TBS 缓冲液 （货号 28358 - 500ml） | Pierce 20X 磷酸盐缓冲液 （货号28348 - 500ml） | Pierce 20X TBS Tween 20 缓冲液 （货号 28360 - 500ml） | Pierce 20X PBS Tween 20 缓冲液 （货号 28352 - 500ml） |
| 配方 |
|
|
|
|
在一系列孵育操作中必须进行漂洗，以除去未结合的试剂并减少背景。漂洗不充分可能导致高背景，同时，过度清洗可能会从印迹上洗脱抗体或抗原而导致灵敏度下降。
漂洗时可能会用到一系列缓冲液。通常在生理缓冲液中进行漂洗步骤，比如 Tris-缓冲生理盐水（TBS）或磷酸盐缓冲生理盐水（PBS）。在缓冲液中加入去垢剂，比如 Tween-20，有助于去除非特异性结合的物质。Tween-20（0.05％-0.2％）的量可根据所用抗体的结合强度而变化。弱结合抗体可能会被过多的去垢剂洗掉。
在使用碱性磷酸酶结合物的应用中，应选择 TBS，因为 PBS 会干扰碱性磷酸酶。进行荧光蛋白质印迹时，建议避免在封闭步骤中使用去垢剂。因为去垢剂会自发荧光，导致背景更高。
为您的分析应用选择适合的缓冲液
| Tween-20 | TBS | PBS | |
|---|---|---|---|
| HRP 标记体系 | 是 | 是 | 是 |
| AP 标记体系 | 是 | 是 | 否 |
| 荧光体系 | 否（在封闭步骤之后使用） | 是 | 是 |
蛋白质印迹的再次检测可节省时间和样品，并可根据实验需求优化检测结果。这类缓冲液的配方独特，专用于剥离蛋白质免疫印迹膜上的一抗和二抗，以在不同条件下对同一张膜进行重复检测，或孵育另一种抗体来检测不同的蛋白靶点。
| Restore 抗体剥离液 | Restore Plus 加强型抗体剥离液 | Restore 荧光抗体剥离液 | |
|---|---|---|---|
| 特点 |
|
|
|
| 印迹膜 | NC 和 PVDF | NC 和 PVDF | 与低荧光 PVDF 膜一起使用（例如 22860） |
| 孵育时间 | 37°C 下 15-30 分钟 | 对于高亲和力抗体，室温或 37°C 下 5-15 分钟 | 室温下 10-20 分钟 |
| 何时选择： | 一抗容易被抗体剥离液洗脱 | 去除高亲和力的一抗 | 去除 NIR 标记的抗体 |
剥离和重新检测印迹的优势
选择剥离和检测蛋白质印迹通常有几个原因。下面几个原因是最主要的：
| 节省样品 | 当蛋白质混合物很少或很珍贵时，重新检测印迹可节省样品，实现在同一张膜上使用相同或不同的抗体进行分析。 |
| 节约时间 | 运行 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后将蛋白质转移到膜上是很费时的。通过在同一张印迹膜上进行多次检测，可以节省时间。 |
| 降低成本 | 通过重复使用相同的印迹，可以节省膜、缓冲液和蛋白质样品的成本。 |
| 检测优化更容易 | 高灵敏度化学发光底物的发光强度通常需要优化抗体浓度来调整，以获取高质量的印迹。通过剥离膜并用不同的抗体浓度进行检测，可以轻松实现优化。 |
| 快速纠正错误 | 免疫印迹的孵育涉及许多操作步骤，很多环节容易出现错误，比如孵错抗体。通过剥离印迹膜，印迹可以重复使用，而无需重新凝胶电泳。 |
信号增强剂
| SuperSignal 信号增强剂 | |
|---|---|
 | 推荐使用情形：由于蛋白丰度极低或免疫反应性很弱，所以难以检测。 产品优势：包含膜处理试剂和一抗稀释液，可将信号强度和灵敏度提高3到10倍。 |
| 货号 | 46640 |
| Clean-Blot IP 免疫沉淀检测试剂 | |
|---|---|
 | 推荐使用情形：在免疫沉淀分析中，IgG重链和轻链片段，干扰了目标蛋白的检测。 产品优势：专用于免疫沉淀后续Western Blot检测的HRP偶联物，不会结合免疫沉淀所用抗体的片段，避免对IP产物检测的干扰。 |
| 货号 | 21230 (单独的HRP试剂) 21232 (Clean-Blot IP 检测试剂盒) |
封闭液
抗体剥离液
技术指南和技术手册
探索我们种类齐全的Western Blot封闭液，帮助优化目标蛋白的检测
| 封闭液 | 封闭剂 | 产品优势 | 使用情形 | 可选类型 |
|---|---|---|---|---|
| 化学发光免疫印迹 | ||||
| StartingBlock 封闭液 | 不含血清和生物素的单一纯化蛋白 |
|
| PBS TBS PBST TBST |
| Blocker酪蛋白封闭液 | 纯化酪蛋白 |
|
| PBS TBS |
| Blocker BSA 封闭液 | 纯化牛血清白蛋白 |
|
| PBS TBS |
| 荧光蛋白免疫印迹 | ||||
| Blocker FL 荧光WB封闭液 | 单一纯化蛋白 |
|
| 10X 浓缩液 |
查看所有可选 western blot 封闭液。
在检测目标蛋白质之前，必须封闭膜的剩余结合表面，以防止抗体的非特异性结合。否则，抗体或其他检测试剂将与膜上最初用于固定目标蛋白的任何剩余位点结合。原则上，对靶标或检测系统组分不具有结合亲和力的任何蛋白质均可用于封闭。
多种封闭液（从牛奶或常规血清到高度纯化蛋白）可用于封闭膜上的自由位点。理想的封闭液将结合到可能发生非特异性相互作用的所有位点，以彻底消除背景，而不会改变或掩盖抗体结合的表位。但通常封闭液会影响抗体的结合和特异性，因此需要优化。没有任何一种蛋白质或蛋白质混合物能适合所有蛋白印迹实验，对于特定抗体、膜类型和底物系统的给定组合，必须进行经验测试才能获得最佳结果。
我们提供常用缓冲液（例如 PBS 和 TBS）的袋装预混干粉和瓶装浓缩液，用于蛋白印迹检测。
| TBS | PBS | TBST | PBST | |
|---|---|---|---|---|
| 预混干粉 | BupH Tris 缓冲液干粉包 （货号 28376 和 28379 - 40, 10 包） | BupH 磷酸盐缓冲液干粉包 （货号 28372- 40 包） | ||
| 浓缩液 | Pierce 20X TBS 缓冲液 （货号 28358 - 500ml） | Pierce 20X 磷酸盐缓冲液 （货号28348 - 500ml） | Pierce 20X TBS Tween 20 缓冲液 （货号 28360 - 500ml） | Pierce 20X PBS Tween 20 缓冲液 （货号 28352 - 500ml） |
| 配方 |
|
|
|
|
在一系列孵育操作中必须进行漂洗，以除去未结合的试剂并减少背景。漂洗不充分可能导致高背景，同时，过度清洗可能会从印迹上洗脱抗体或抗原而导致灵敏度下降。
漂洗时可能会用到一系列缓冲液。通常在生理缓冲液中进行漂洗步骤，比如 Tris-缓冲生理盐水（TBS）或磷酸盐缓冲生理盐水（PBS）。在缓冲液中加入去垢剂，比如 Tween-20，有助于去除非特异性结合的物质。Tween-20（0.05％-0.2％）的量可根据所用抗体的结合强度而变化。弱结合抗体可能会被过多的去垢剂洗掉。
在使用碱性磷酸酶结合物的应用中，应选择 TBS，因为 PBS 会干扰碱性磷酸酶。进行荧光蛋白质印迹时，建议避免在封闭步骤中使用去垢剂。因为去垢剂会自发荧光，导致背景更高。
为您的分析应用选择适合的缓冲液
| Tween-20 | TBS | PBS | |
|---|---|---|---|
| HRP 标记体系 | 是 | 是 | 是 |
| AP 标记体系 | 是 | 是 | 否 |
| 荧光体系 | 否（在封闭步骤之后使用） | 是 | 是 |
蛋白质印迹的再次检测可节省时间和样品，并可根据实验需求优化检测结果。这类缓冲液的配方独特，专用于剥离蛋白质免疫印迹膜上的一抗和二抗，以在不同条件下对同一张膜进行重复检测，或孵育另一种抗体来检测不同的蛋白靶点。
| Restore 抗体剥离液 | Restore Plus 加强型抗体剥离液 | Restore 荧光抗体剥离液 | |
|---|---|---|---|
| 特点 |
|
|
|
| 印迹膜 | NC 和 PVDF | NC 和 PVDF | 与低荧光 PVDF 膜一起使用（例如 22860） |
| 孵育时间 | 37°C 下 15-30 分钟 | 对于高亲和力抗体，室温或 37°C 下 5-15 分钟 | 室温下 10-20 分钟 |
| 何时选择： | 一抗容易被抗体剥离液洗脱 | 去除高亲和力的一抗 | 去除 NIR 标记的抗体 |
剥离和重新检测印迹的优势
选择剥离和检测蛋白质印迹通常有几个原因。下面几个原因是最主要的：
| 节省样品 | 当蛋白质混合物很少或很珍贵时，重新检测印迹可节省样品，实现在同一张膜上使用相同或不同的抗体进行分析。 |
| 节约时间 | 运行 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后将蛋白质转移到膜上是很费时的。通过在同一张印迹膜上进行多次检测，可以节省时间。 |
| 降低成本 | 通过重复使用相同的印迹，可以节省膜、缓冲液和蛋白质样品的成本。 |
| 检测优化更容易 | 高灵敏度化学发光底物的发光强度通常需要优化抗体浓度来调整，以获取高质量的印迹。通过剥离膜并用不同的抗体浓度进行检测，可以轻松实现优化。 |
| 快速纠正错误 | 免疫印迹的孵育涉及许多操作步骤，很多环节容易出现错误，比如孵错抗体。通过剥离印迹膜，印迹可以重复使用，而无需重新凝胶电泳。 |
信号增强剂
| SuperSignal 信号增强剂 | |
|---|---|
| 推荐使用情形：由于蛋白丰度极低或免疫反应性很弱，所以难以检测。 产品优势：包含膜处理试剂和一抗稀释液，可将信号强度和灵敏度提高3到10倍。 |
| 货号 | 46640 |
| Clean-Blot IP 免疫沉淀检测试剂 | |
|---|---|
| 推荐使用情形：在免疫沉淀分析中，IgG重链和轻链片段，干扰了目标蛋白的检测。 产品优势：专用于免疫沉淀后续Western Blot检测的HRP偶联物，不会结合免疫沉淀所用抗体的片段，避免对IP产物检测的干扰。 |
| 货号 | 21230 (单独的HRP试剂) 21232 (Clean-Blot IP 检测试剂盒) |
封闭液
抗体剥离液
技术指南和技术手册
演示视频
如何进行膜的封闭和抗体孵育
观看蛋白转印到膜上之后的Western Blot操作步骤
如何剥离抗体并重新检测印迹膜
观看如何使用Restore抗体剥离液来重新检测您的Western Blot印迹
相关资源
仅供科研使用，不可用于诊断目的。