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Invivofectamine 3.0 试剂—体内 siRNA 递送
一种 使用节肢动物体内转染试剂
作为用于体内RNAi递送的突破性试剂，Invivofectamine 3.0试剂改善了转染性能，包括使用微克级别的siRNA达到高达85%的基因沉默效果。
- 易于使用— siRNA 复合物只需几步即可递送
- 有效的靶向敲低—在检测的靶标时观察到高达 85% 的基因敲低率
- 使用更少的 siRNA 样品— siRNA 的有效敲低效率比之前试剂需要的 siRNA 少 90%
- 持续敲低—单次进样后观察到长时间的基因敲除
- 低毒性—复合物 在体内 毒性方面表现出极低的水平
Invivofectamine 3.0试剂的订购信息
制备易于 在体内 递送的 siRNA RNAi Invivofectamine 复合物
制备 Invivofectamine 3.0 试剂和 RNAi 双链体的复合物 极为容易：只需混合，孵育 (30 分钟) ，稀释和进样 (图 1)。
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图 1.可快速制备注射即用型 RNAi /Invivofectamine 3.0 试剂复合物，只需几步。步骤 1 说明了络合缓冲液与 siRNA 双链组合。第 2 步显示 Invivofectamine 3.0 试剂和稀释 siRNA 的混合。第 3 步显示了复合物的摇晃情况。步骤 4 展示了在 50°C 下培养 30 分钟。步骤 5 显示在背静脉顶部侧尾静脉上添加了现已准备就绪的复合物。
使用 Invivofectamine 3.0 试剂有效敲低靶标 mRNA
Invivofectamine 3.0 试剂和 Ambion 体内 siRNA 靶向因子 VII 或 Stealth RNAi PPIB 的复合物已通过小鼠尾静脉注射成功递送到肝脏组织，这一点在 mRNA 水平上有效敲低因子 VII 和 PPIB 而证明 (图 2)。
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图2.使用 Invivofectamine 3.0 转染试剂显示单个静脉注射后肝脏中的靶向基因敲低。Invivofectamine 3.0 试剂与靶向因子 VII (FVII) 或 PPIB 的 siRNA 复合，以 1 mg/kg 小鼠体重量 (mg/kg) 注射，可达到多达 85% 的靶标 mRNA 水平敲低 (通过 TaqMan 测定评估敲低)。
lipofectamine 体内试剂需要较少的 siRNA 以实现有效敲低
通过尾静脉注射引入一系列量的 Invivofectamine 3.0 试剂和 siRNA 复合物。注射后 24 小时使用显色测定法测量血清中的 FVII 蛋白水平 (图 3)。敲低量与 Invivofectamine 3.0 试剂和 siRNA 复合物中的 siRNA 量相关，该复合物通过尾静脉注射引入。Invivofectamine 3.0 试剂的 ED50 为 0.1 mg/kg ，与以前的 1.0 mg/kg 水平相比。
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图 3.靶向 FVII 的 Invivofectamine 3.0 试剂和 siRNA 可在单个静脉注射后在肝脏中产生剂量反应敲低。Invivofectamine 3.0 试剂与 靶向 FVII 的 Ambion 体内 siRNA 复合物，注射的剂量范围为 0.02 至 2 mg/kg。分离血液血清并测定 FVII 蛋白水平 (Biophen® 显色测定)。
单次进样 Invivofectamine 3.0 试剂 /siRNA 复合物后，持续敲低
单次进样 Invivofectamine 3.0 Reagent /siRNA 复合物可在第 1 天获得显著敲低效果 ，持续长达 3 周 (图 4)。注射复合物中更高的 siRNA 量使在测试范围内的敲低更持久。
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图4.使用三种浓度的 siRNA 靶向因子 VII (FVII) 研究剂量效应。 siRNA 分子与 Invivofectamine 3.0 试剂复合，并注射剂量为 1 ， 0.5 和 0.25 mg/kg。在第 2 ， 5 ， 9 ， 16 ， 23 天采集血清 然后用发色测定法分析血清中的 FVII 蛋白敲低。
使用 Invivofectamine 3.0 试剂进行的体内递送的基因表达敲低会导致预期的表型变化
载脂蛋白 B (APOE) 是低密度脂蛋白 (LDL) 的主要载脂蛋白，可将胆固醇输送至组织。监测 APOE 降低表达的研究显示，胆固醇和甘油三酯水平降低。使用高效敲低，与靶向 APOB 的 siRNA 复合的 Invivofectamine 3.0 转染试剂显示 胆固醇和甘油三酯水平均存在特异性降低 (图 5)。Invivofectamine 3.0 试剂的特异性和有效性有助于研究人员使观察到的表型归因于特异性靶标敲低，而非非特异性毒性。
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图 5.靶向 APOE 的 Invivofectamine 3.0 试剂和 siRNA 在单次静脉注射后在肝脏中实现敲低。 将与 APOB siRNA 复合的 Invivofectamine 3.0 试剂注入剂量为 1.5 ， 0.5 和 0.25 mg/kg。递送含 1.5 mg/kg siRNA 的复合物 >，导致 mRNA 敲低 80% ，蛋白质水平 ~70% 的敲低。分离出血液血清并检测胆固醇 土地 LDL 含量，结果表明， APOB 蛋白的敲低可显著降低胆固醇和 LDL。
Invivofectamine 3.0 试剂的体内毒性较低
注射试剂后，在多个时间点进行血化学分析和细胞因子测量，以便评估 Invivofectamine 3.0 试剂的体内毒性。（图 6 和 7）结果显示，使用 Invivofectamine 3.0 试剂转染的个体中检测的生物标记物水平与未收到试剂的水平无显著差异。
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图 6.使用 Invivofectamine 3.0 试剂对注射的小鼠样品进行血液化学分析。与 Ambion 体内 siRNA 复合的 Invivofectamine 3.0 试剂靶向 FVII ，以 1 mg/kg [1] ， 3 mg/kg [3] ，或未处理的 [U] 向小鼠中注射。在 2 ， 24 和 48 小时内采集血样，并使用临床化学分析对几种生物标志物 (Antech) 进行评估：葡萄糖 (Glu ， in mg/dL) ，碱性磷酸酶 (ALP ， in U/L) ，丙氨酸氨基转移酶 (ALT ， 单位： U/ L) ，天冬氨酸氨基转移酶 (AST ，单位： U/ L) ，总胆红素 (TBIL ，单位： mg/dL) ， 胆固醇 (Chol ，单位为 mg/dL) 和甘油三酯 (三联，单位为 mg/dL)。每个条形图由四个复制的数据组成。
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图7.使用 Invivofectamine 3.0 试剂对注射的小鼠样本进行细胞因子分析。将与 Ambion 体内 siRNA 复合的 Invivofectamine 3.0 试剂以 0.25 mg/kg 的剂量注射 (使用和不添加地塞米松 (Dex))。进样后，在 2 ， 6 ， 24 和 48 小时采集血样，并使用多重微珠免疫检测试剂盒测量细胞因子水平。作为对照，未使用试剂处理的个体样品进行相同的细胞因子检测板检测。每个条形图由三个复制的数据组成。
解冻后 Invivofectamine 3.0 试剂的稳定性
Invivofectamine 3.0 试剂的长期储存温度建议为– 20°C ，但 Invivofectamine 3.0 试剂可在解冻后至少 14 天保存于 4°C 下 (图 8)，使您能够在数天内延长实验时间，无需重新冷冻试剂。但如果需要，试剂可冷冻和解冻多达 4 次，而不会损失性能 (数据未显示)。
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图8.Invivofectamine 3.0 试剂储存在– 20°C 下可解冻，并在 4°C 下储存长达 14 天。Invivofectamine 3.0 试剂与 FVII siRNA 解冻和复合，以 0.125 和 0.5 mg/kg 剂量注射到静脉中。将相同解冻试剂的等份试液用于在第一次进样后 6 和 14 天内形成复合物，以便进行后续进样。每次 siRNA 注射后，采集血液并评估 FVII 蛋白水平 (Biophen® 显色测定)。
转染常见问题
仅供科研使用，不可用于诊断目的。
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