特殊和自动化RNA分离支持——入门

请使用选择指南查看我们提供的各种mRNA纯化试剂盒，以及它们之间的区别。在 Dynabeads网页可以获取更多关于Dynabeads mRNA试剂盒的信息。

使用RNAqeous家族的试剂盒提取的为200 nt以上的RNA，所以这些试剂盒不适合提取5S rRNA 或tRNA。但是，RNAqueous-Micro Total RNA Isolation试剂盒提供一个改进的实验方案，可以从样本分离miRNA。

请使用选择指南来比较用于miRNA提取的不同试剂盒。

• 沉淀miRNA：根据mirVANA™ miRNA Isolation试剂盒或mirVANA™ PARIS™试剂盒的说明进行操作。
• 两次酚/胍(离液试剂)提取：使用酚/胍盐裂解组织，然后用酚提取，离心，取上清，并沉淀RNA。
• 玻璃纤维过滤：使用离液剂裂解组织，将RNA结合在玻璃纤维膜上，然后洗涤除去未结合的DNA/蛋白/盐/核苷酸，然后洗脱RNA。

对于福尔马林固定样本，我们推荐使用RecoverAll™FFPE样品总核酸分离试剂盒。您可以使用此试剂盒从FFPE样品中提取总RNA和miRNA，然后按照miRVana™试剂盒说明中的富集方案对上述样本内的miRNA进行富集。对于未固定的LCM样品，您可以使用RNAqueous试剂盒

不能，由于该纯化柱的截留分子量较低（大约为200bp），小RNA将会在使用这种纯化方法时丢失。

是的，您可以使用修改版的Megaplex™ Pools microRNA表达分析实验方案 (组分号 4399721，B版)。在该方案中，调整逆转录和预扩增反应体系以包含所有的细胞裂解物。

是的。您将需要按照另一个实验方案操作，点击此链接获取。

Poly(A)Purist™ 试剂盒和MicroPoly(A)Purist™试剂盒使用基于oligo(dT)纤维素的富集方法，而Poly(A)Purist™ MAG试剂盒采用基于oligo(dT)磁珠的纯化方法。Poly(A)Purist™试剂盒和Poly(A)Purist™ MAG试剂盒的样品为总RNA，而MicroPoly(A)Purist™试剂盒可以从总RNA中或直接从少量组织或哺乳动物细胞中提取mRNA。

有的，您可以加入1/10体积的3 M NaOAc，然后进行乙醇沉淀。

点击查看RiboMinus™工作流程。

对于物种特异性来说，以下物种对于LSU/SSU探针没有任何错配(LSU (28S) / SSU (18S)探针完美配对）。这意味着探针可从下列物种中去除18S和28S序列。

* 该试剂盒中的28S和18S探针分别和果蝇的 18S和28S rRNA序列完全匹配。但是，有报道表明果蝇(昆虫)的 28S rRNA会分裂为2个较小片段并与18S共迁移。目前准确的分裂位点还未被找到。但是，基于用户的反馈，该试剂盒并不能完全去除分裂的28S rRNA。我们也没有用该试剂盒测试过果蝇样本。
5S和5.8S序列更具多样性，因此效果好的探针所使用的物种范围可能会较小：
5S: 0至1个错配:人，小鼠,，大鼠，青蛙,，鸡，果蝇，线虫， 拟南芥，玉米
5.8S: 0错配: 人, 小鼠,，大鼠

纯化后的RNA可以方便的用260 nm 紫外吸光值或Quant-iT™ RNA Assay试剂盒进行定量。要验证rRNA的去除效果，可以对样本进行琼脂糖凝胶电泳检测或使用Agilent 2100 Bioanalyzer进行分析。与对照相比，样本的琼脂糖凝胶电泳应无18S和28S rRNA条带。通过琼脂糖凝胶电泳也可以判断样品是否有DNA污染及RNA降解。rRNA的去除效率，RNA的降解，以及RNA的浓度也都可以通过Bioanalyzer进行分析。

我们为此提供以下试剂盒：

• PureLink 病毒RNA/DNA小提试剂盒 (硅胶离心柱)
• PureLink Pro 96 病毒l RNA/DNA 纯化试剂盒 (96孔硅胶板)
• Dynabeads SILANE病毒核酸提取试剂盒
• 链霉亲和素偶联的 Dynabeads磁珠
• MagMAX™病毒RNA分离试剂盒
• MagMAX™-96 病毒RNA分离试剂盒
• MagMAX™-96 禽流感/新城疫病毒RNA分离试剂盒
• iPrep™ PureLink 病毒试剂盒

是的，您可使用如下产品：

• PureLink 病毒RNA/DNA小提试剂盒 (硅胶离心柱)
• PureLink Pro 96 病毒l RNA/DNA 纯化试剂盒 (96孔硅胶板)
• Dynabeads SILANE病毒核酸提取试剂盒
• 链霉亲和素偶联的 Dynabeads 磁珠

您需要在提取前将病毒从细胞中分离出来，以避免样品中细胞核酸的污染。

请参阅RNA样本收集，保护，以及提取支持中心 以获取更多信息。

这里是我们单独出售的DNA/RNA纯化缓冲液列表。

请点击此链接了解两套系统的比较结果。

脚本可以从我们的网站下载。

MagMAX™ Express-96磁珠处理仪可兼容MagMAX^TM Express-96孔板，深孔反应板（方孔）及PCR反应板（带裙边）。每一类型的反应板都有对应的优化过的MagMAX^TM Express-96磁棒头和吸头。在这三种类型反应板中，MagMAX^TM Express-96孔板可兼容所有三类磁头。方形孔的深孔板的样本最小体积必须为每孔2.2 mL（带盖2.0 mL）。

可以。您可在同一次运行中使用深孔板和MagMAX^TM Express-96孔板。因此，您可以先采用较大体积的反应板开始处理，之后将纯化样本洗脱到小体积反应板（MagMAX^TM Express-96孔板）中。

我们提供完整的MagMAX^TM Express-96系统（又称MagMAX^TM Express-96磁珠处理仪），能够以96孔板的形式纯化和处理蛋白、DNA、RNA和细胞样品。该处理仪能按照预先载入的纯化方案自动处理磁珠。

MagMAX^TM Express-96的磁体使用非常稳定的材料制成。磁体的磁性不会变弱。不过，极端的机械外力或加热可能会对磁体造成损坏。注：务必使MagMAX^TM Express-96的磁棒头远离其他磁棒或其他磁体。磁体相互撞击会引起严重损坏。

MagMAXTM Express-96系统不可靠近磁带、计算机磁碟及信用卡等磁性存储系统，这些物品可能会被MagMAXTM Express-96磁棒的强力磁场所损坏。MagMAXTM Express-96磁棒头不可靠近PC显示器，否则将可能造成显示器损坏。操控MagMAXTM Express-96磁棒头时，不可使用金属工具。

警告：本产品含有强力永磁体。佩戴心脏起搏器或金属义肢的人员不宜使用此设备。心脏起搏器或义肢靠近强磁场时，性能可能受到影响或发生损坏。

加热模块位于仪器内部，在实验方案执行过程中会被自动调用。MagMAXTM Express-96孔板与PCR反应板（带裙边）都能够通过专门设计的，可互换的加热模块进行加热。在实验方案中，可添加任意数量的加热步骤。在实验方案的执行过程中，当进入加热步骤时，反应板会自动移至专用的加热位置。加热步骤结束后，实验方案将自动进入下一步骤。

注：无法加入冷却步骤。

加热模块每分钟升温10°C，因此需要6分钟左右。

我们强烈建议保持每孔的液体体积在指定的限值范围内，以免试剂溢出。

在运行过程中您可以按“停止”按钮以暂停程序。如果您再按一次“开始”，则会继续运行。如果您按“停止”按钮两次，则运行完全停止。无法从一个实验方案的中间开始运行。

由磁套进行的试剂混合发生在液面以下，这样可防止使用MagMAX^TM Express仪器时出现气溶胶和溢出。

共有2排，每排12个磁棒头；2个上样板。

推荐使用深孔板。对于更大体积的样品（可达400 μL），请使用深孔配置。

很遗憾，没有。

有的，您可以使用0.1 mM EDTA作为替代品（但是磁珠会沉降得慢一些）。

下列表格显示了不同 MagMAX™试剂盒之间通用的试剂：

*在不同试剂盒中的同一试剂的体积会有所不同，但是成分是相同的。

如果将结合液和洗涤液1中异丙醇的浓度调整为50%，洗涤溶液2和洗脱溶液保持不变，MagMAX™ 磁珠处理仪即可以捕获小RNA。如果在使用AM1839时使用这种改进的方法，预期的 miRNA回收率是最高的。

AM1836是一个很好的选择， AM1835可以作为备选。

可以，载体RNA可以单独订购，货号是4382878。

可以，将结合液和洗涤液1中异丙醇的浓度调整为50%以沉淀小RNA。但是，我们还没有检测过这个方法的效果。

有的，Applied Biosystems™ MagMAX™ mirVana 总RNA试剂盒(货号A27828) 可以从多种样本（血清，血浆，全血，组织，细胞，尿液）同时提取小RNA和大RNA。

您可以根据您的实验操作习惯及具体实验需求选择磁力架。使用AM10027的磁力架，磁珠会聚集每孔的一侧，这样更有利于使用移液器从孔的另一侧吸取液体。AM10050的磁极在孔的周围，因此磁珠会在孔的周围聚集成环，更有利于使用自动化液体操作平台进行操作。

是的，iPrep^TMPureLink总RNA试剂盒可胜任此项应用。当屏幕上出现提示时，您可选取“No DNase（无DNA酶）”项。这样仪器就会收集样本中所有类型的核酸。不过，此试剂盒并没有为纯化DNA而进行过优化，所以由于裂解/结合缓冲液中GITC的存在，RNA和磁珠的结合能力会高于DNA。

iPrep^TM纯化仪能够从多达13份样本（12份样本和1份阳性对照）中自动纯化核酸。您需要购买一款iPrep^TM试剂盒，其中包含了样本制备试剂，其它相关试剂以及iPrep^TM实验方案储存卡（iPrep^TM Protocol Card），后者中预先编有纯化方案程序，指定了所应用的试剂体积和孵育时间。

是的，所有MagMAX™试剂盒都能用于KingFisher™ Flex 磁珠处理仪。

KingFisher™ Flex 磁珠处理仪有四种磁棒选择：

- 用于MagMAX™ Express-96深孔板的KingFisher™ Flex磁棒

- 用于KingFisher™ 24深孔板的KingFisher™ Flex磁棒

- 用于KingFisher™ 96孔板的KingFisher™ Flex磁棒

- 用于有裙边PCR板的KingFisher™ Flex磁棒

不可以，96孔标准磁棒头和96深孔磁棒头不能互换。但是，两台仪器可以使用相同的磁棒套。

带96深孔磁棒头的KingFisher™ Flex仪器和MagMAX™ Express-96仪器所需的耗材是相同的。列表如下：

- MagMAX™ Express-96 深孔板 (货号 4388476)

- MagMAX™ Express-96 标准板(货号4388475)

- MagMAX™ Express-96深孔磁棒套(货号4388487)

- MagMAX™ Express-96 标准磁棒套(货号 4388488)

- MicroAmp™ 透明封口膜（可选）： (货号. 4306311)

对于带24深孔磁棒头的KingFisher™ Flex仪器，所需耗材列表如下：

- KingFisher™ Flex 24深孔板：(货号. 95040480)

- KingFisher™ Flex 24深孔磁棒套： (货号 97002610)

不行，我们强烈推荐您使用MagMAX™板或KingFisher™板，因为它们是专为配合KingFisher™ Flex磁棒套同时使用而设计的，以达到最佳效果。其它制造商生产的板子可能与KingFisher™ Flex加热模块不兼容。它们还可能引起意料之外的问题，例如可能会由于不同的孔容积和板底高度而引起交叉污染。

可以，反应体积可以扩大，并且所有其它体积（例如洗涤体积）需要以相同倍数扩大。除非板的容积允许，我们强烈建议反应体积扩大不应超过2倍。

可以，可将样品分装。在进行下一步之前，设置程序使得磁头可以从多个孔内收集样本。确保不要过量加样。

对于核酸提取，我们建议使用我们的MagMAX™试剂盒和MagJET试剂盒。其它大小在0.5到10 µm间的磁珠应该也可以使用。但是，您需要自己用Thermo Scientific™ BindIt™软件编写您自己的KingFisher™实验方案，并自己验证/优化这一实验方案。

BindIt™软件和Windows™ XP (Professional with Service Pack 3)，Windows™ Vista (Service Pack 2), Windows™ 7 (Service Pack 1), 以及Windows™ 8兼容。

不能，出厂实验方案不能编辑，但是您可以使用“另存为”功能对其重命名，然后将它作为一个新的版本来编辑。

是的，MagMAX™ Express-96仪器可以和装有最新版本BindIt™软件v3.3.1.7的电脑相连。这种连接需要一个到USB转化器的串行端口。已有的.kf2 文件在BindIt™软件内不能被编辑，但是可以将.kf2文件重写为.bdz文件从而可以被编辑。请参见应用注意了解更多细节。

实验方案不能从KingFisher™ Flex仪器转移到电脑。实验方案需要被存储在BindIt™软件内之后才可以进行编辑。

KingFisher™ Flex使用一个USB接口，而MagMAX™ Express- 96需要一个RS-232接口。

The KingFisher™ Flex magnets are made of material that is very stable. The magnetic field will not get weaker. However, extreme mechanical force or heating can cause damage to the magnets.

Caution: It is very important to keep the KingFisher™ Flex heads away from each other and from other magnets at all times. Clashing together of the magnets may cause serious damage to the magnets.

The KingFisher™ Flex磁体是使用非常稳定的材料制成的。磁场不会变弱。不过，极端的机械外力或加热可能会对磁体造成损坏。

注：务必使KingFisher™ Flex的磁棒头远离其他磁棒或其他磁体。磁体相互接触会引起严重损坏。

可以通过运行“维护 (Maintenance)”菜单之下的“更换磁头 (Change magnet)”程序实现，使用“上 (up)”和“下 (down)”按钮进行选择。

您可在同一次运行中使用深孔板和KingFisher™ 96孔板。因此，您可以先采用较大体积的反应板开始处理，之后将纯化样本洗脱到小体积反应板（KingFisher™ 96孔板或MagMAX™ Express-96孔板）中。

加热模块每分钟升温10°C，因此需要6分钟左右。

我们强烈建议保持每孔的液体体积在指定的限值范围内，以免试剂溢出并确保最佳结果。

转移锁仅在移动仪器时有必要使用。

在BindIt™软件中设置实验方案。在完成前8块板后，仪器将暂停并提示您将板换出。

不是，处理体积指的是24孔深孔板内可以装入的最大体积。这包括结合缓冲液的体积和磁珠体积，所以当扩大反应体积时，一定要确保总体积不超过5mL。

是的，试剂盒内带有一块处理板，两块洗脱板，以及四个板盖，用于手动处理样本。但是，如果您希望使用KingFisher ™仪器，那么您需要额外购买深孔板，标准板，以及磁棒套。

可以，但是我们仅建议将样品在裂解结合缓冲液中于-20度储存不超过4天。在进行RNA纯化前应该将样本融化并平衡至室温。

不行，我们建议每次都新鲜制备蛋白酶K消化液。

您可以在产品页面找到MagMAX™ mirVana™总RNA提取试剂盒在MagMAX™ Express-96, KingFisher™ Flex, 或KingFisher™ Duo仪器上使用的脚本。