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Sanger 测序工作流程
使用我们经验证的工作流程生成高质量的 Sanger 测序数据
我们简单且快速的 Sanger 测序工作流程可以在不到一个工作日内完成从提取样本到获得结果。从 PCR 扩增到数据分析，我们推荐的工作流程中的许多步骤都能获得 Applied Biosystems 产品的支持。请由下方来详细了解我们推荐的 Sanger 测序工作流程的每个步骤。
视频：如何进行 Sanger 测序
工作流程
用于 PCR 和 Sanger 测序的引物设计工具
使用我们的在线 Invitrogen™ Primer Designer™ 工具，从数据库中搜索正确的 PCR/Sanger 测序引物对。我们的数据库包含约 650,000 个用于人类外显子组和人类线粒体基因组测序的预设计引物对。从不同的扩增子长度中进行选择，以适应不同的研究应用和生物样本类型。
- 我们的引物不含已知的 SNP 和引物二聚体，具有高度靶点特异性，适用于通用 PCR 条件
- 完全的引物覆盖，适用于 Ion Torrent™ AmpliSeq™ Exome Panel 和 Ion Torrent™ AmpliSeq™ Cancer Hotspot Panel v.2 Sanger 验证工作流程
- 灵活的引物配置，可满足您的研究需求：引物可订购无修饰、M13 加尾、HPLC 纯化或脱盐形式
- 所有引物都经过质谱检查，并且已通过严格的生物信息学度量；实验台验证测试显示成功率 >95%
Platinum II Taq 热启动 DNA 聚合酶
Invitrogen Platinum II Taq 热启动 DNA 聚合酶可帮助您更快地进行测序反应。创新缓冲液、高性能 Taq DNA 聚合酶和 Platinum 热启动技术的独特组合即使在严苛的应用中也能获得出色的 PCR 结果。
- 通用引物在 60°C 退火，可实现所有检测的共循环，减少繁琐的优化步骤
- 工程化 Taq 聚合酶使 DNA 合成速度提高 4 倍，且具有抑制剂抗性和强大的扩增能力
- Platinum 热启动技术——可提供出色的特异性、灵敏度及产量；并可实现室温条件反应设置
- 2X 预混液有助于通过更少的移液步骤减少移液错误
可参考thermofisher.com/platinumiitaq以查看更多格式和信息。
视频：如何使用 ExoSAP-IT Express 试剂进行 PCR 反应的纯化
BigDye Direct 循环测序试剂盒
Applied Biosystems BigDye Direct 循环测序试剂盒通过将 PCR 后的纯化和循环次数整合至一步，简化了 Sanger 测序的工作流程。BigDye Direct 循环测序试剂盒需要 PCR 引物带有 M13 尾，可通过引物设计工具进行获取。
视频：使用 BigDye Direct 循环测序试剂盒进行测序
BigDye Terminator v3.1 循环测序试剂盒
BigDye Terminator v3.1 循环测序试剂盒由专家创建并由专业团队改进，具有出色的多功能性和高性能。 这是一个完整的详尽解决方案，专为 PCR 产物、质粒、Fosmid 和 BAC 模板进行从头测序、重测序和拼接而设计。
可在使用具有挑战性的模板时提高结果质量和成功率
- 适用于多种测序应用
- 针对长读长应用进行了优化
- 先进的染料迁移性能
- 在连读富含 GT 的区域时具有更好的性能
- 优化的信号平衡
- 快速完成测序项目
BigDye Terminator v1.1 循环测序试剂盒
Applied Biosystems BigDye Terminator v1.1 循环测序试剂盒对于靠近引物的碱基有出色识别能力，并可用于快速电泳模式下的短 PCR 产物模板测序。
视频：如何使用 BigDye Xterminator 试剂盒纯化测序反应
仪器上的耗材对于测序反应至关重要。使用正确的 Applied Biosystems 产品将有助于降低重新测序的几率并确保高质量可重复数据的获取。
SeqStudio 卡夹
Applied Biosystems SeqStudio 卡夹是一款易于使用的试剂卡夹，包含毛细管、POP-1 通用型胶、缓冲液和真空泵。POP-1 通用型胶使您可在 SeqStudio 基因分析仪系统上使用同一卡夹，灵活地进行 Sanger 测序和片段分析。直接上样，插入卡夹即可运行。
视频：如何设置 Sanger 测序或进行片段分析
Minor Variant Finder 软件
通过 Applied Biosystems Minor Variant Finder 软件而实现的灵敏度提升使得 Sanger 法测序成为肿瘤学家和病理学家用于低频（5%或更低）体细胞突变（通常相关目标的数量也有限）检测的理想选择。该软件不需要对您现有的 Singer 测序工作流程做出改变。
优势包括：
- 检测频率低至5%的低频突变
- 低成本实现中等数量目标的测序
- 用于二代测序结果的验证，并可提供比对视图及韦恩图结果
视频：如何使用 Sanger 测序进行低频突变的检测
Sanger Analysis Modules—免费云端工具
Applied Biosystems Sanger Analysis Modules 是免费的创新性云端辅助数据分析工具，可将多个数据集结果简便地汇总在一起。该在线解决方案可更加容易地进行 Sanger 测序数据的查看、储存和分析。
主要优势包括：
- 二代测序（NGS）结果验证—对 NGS 变异结果进行集中验证
- 带有绝对基因组坐标信息报告—不再需要根据参考基因组进行计算
- 自动化数据库查询—对于 SNP 可自动添加基因组注释信息
- .Vcf 格式文件输出便于下游分析—利用 Ion Reporter 注释流程在多个数据库中进行查询
Sanger 测序试剂盒
Applied Biosystems Sanger 测序试剂盒为准备测序反应提供了一种方便且实惠的解决方案。该试剂盒提供 PCR 产物纯化、循环测序和测序产物纯化所需的所有试剂。 了解更多信息 ›
Sanger 测序化学研究指南
供科学家和研究人员使用 Sanger 法测序的完整手册在该化学手册中，您将了解到 Sanger 测序从工作流程到应用的基本原理。
相关资源
支持
搭建您的知识库
您对Sanger测序有任何问题吗？ Seq It Out系列视频将为您的日常测序问题提供简短的解答。
了解测序的历史，以及如何为您的研究需求选择合适的平台。
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仅供科研使用，不可用于诊断目的。