Stimulated Emission Depletion Microscopy (STED) STED 显微镜检查使用两个激光脉冲来定位每个焦点上的荧光。第一个脉冲用于将荧光基团激发至荧光状态,第二个脉冲是经改良的光束,用于对激发焦点周围的所有荧光基团进行去激发。在整个样品上对焦点进行光栅扫描以生成图像,因此对于大视野采集速度相对较慢。该技术的一个主要优势是景深大(深达 10–15 µm),能够以高分辨率成像。

如果使用合适的染料,x 和 y 分辨率可以达到 30 nm,z 分辨率与传统共聚焦显微镜检查相当。要在 STED 中实现最佳性能,荧光基团属性应与仪器系统的激发和消耗光束波长匹配。大量出版物展示了在 STED 显微镜检查中使用 Molecular Probes® 染料。

利用荧光蛋白进行活细胞标记

STED 主要使用有机荧光基团,但可以使用荧光蛋白(特别是 GFP)进行活细胞成像。Molecular Probes® CellLight® 试剂是一种靶向特定亚细胞结构的即用型荧光蛋白构建体(GFP 或 tagRFP)。这些试剂为在活细胞内引入靶向细胞内标记提供了一种简单有效的方法。线粒体、溶酶体、膜、细胞骨架和细胞核等特定细胞器都可以在活细胞中或固定后使用 CellLight® 试剂进行显像。CellLight® 试剂在活细胞中可以结合多种荧光基团进行多重检测,也可以使用免疫荧光技术进行固定和成像。

抗体偶联物和标记

Molecular Probes® 荧光基团已在 STED 应用中作为抗体偶联物(适用于固定细胞应用)以及蛋白、葡聚糖或其他生物分子的偶联物(适用于固定的细胞或活细胞)经过了反复试验和测试。使用下面的 STED 产品选择指南,为您的应用选择具有最佳波长和 STED 等级的荧光基团——每项均列出了文献列表。在该应用中,多种 Alexa Fluor® 探针都表现出色,为您提供了在每个通道中进行多重检测的选项。根据选择指南中的产品链接,您还可以找到目前可靶向您目标分子的每个荧光基团的所有生物偶联物;列表范围包括抗体和鬼笔环肽到生长因子和凝集素。如果您在列表中未找到所需的偶联物,链接中还包括活性染料表单或优化的标记试剂盒,您可借此创建自己的生物偶联物探针。

CellTrace™ 钙黄绿素绿色 AM 染料

CellTrace™ 钙黄绿素绿色 AM 染料是一种常用于测定真核细胞细胞活力的细胞可透过性染料。在活细胞中,当细胞内酯酶去除乙酰氧基甲基 (AM) 酯后,非荧光的 CellTrace™ 钙黄绿素绿色 AM 染料转化为绿色荧光钙黄绿素。

STED 产品选择指南
 GFP
靶标表达蛋白
STED 波长 (nm)575
参考文献文献列表
激光谱线 (nm)488
标准滤光片组FITC
激发/发射波长 (nm)488/510
 查找产品
 Alexa Fluor® 488Oregon Green®Pacific Orange® Alexa Fluor® 594
靶标标记标记标记标记
参考文献文献列表文献列表文献列表文献列表
激光谱线 (nm)488488405594
标准滤光片组FITCFITCTRITCTexas Red® 染料
激发/发射波长 (nm)495/519501/526400/551590/617
 查找产品查找产品查找产品查找产品
 CellTrace™ 钙黄绿素绿色
靶标细胞质
参考文献文献列表
激光谱线 (nm)488
标准滤光片组FITC
激发/发射波长 (nm)494/516
货号C34852
 GFP
靶标表达蛋白
STED 波长 (nm)575
参考文献文献列表
激光谱线 (nm)488
标准滤光片组FITC
激发/发射波长 (nm)488/510
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 Alexa Fluor® 488Oregon Green®Pacific Orange® Alexa Fluor® 594
靶标标记标记标记标记
参考文献文献列表文献列表文献列表文献列表
激光谱线 (nm)488488405594
标准滤光片组FITCFITCTRITCTexas Red® 染料
激发/发射波长 (nm)495/519501/526400/551590/617
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 CellTrace™ 钙黄绿素绿色
靶标细胞质
参考文献文献列表
激光谱线 (nm)488
标准滤光片组FITC
激发/发射波长 (nm)494/516
货号C34852

仅供科研使用,不可用于诊断目的。