Two Photon Excitation Microscopy (TPE) TPE 是一种利用多光子吸收对活体样本进行成像的光学过程,这种技术比传统的共焦显微镜检查的光毒性更低。双光子显微镜使用红外激发光进一步穿透到组织中,与在较长波长下激发相比,散射极小。对于荧光基团的每次激发,红外光的两个光子被吸收,激发仅限于微小的焦点体积,因此离焦荧光的影响较小。

双光子成像已应用于多种活细胞应用,包括离子浓度、细胞骨架组织、活性氧检测和囊泡再循环成像。

标记和生物偶联物

Molecular Probes® 荧光基团已在 TPE 应用中作为抗体、蛋白、葡聚糖或其他生物分子的偶联物经过了反复试验和测试。使用下面的列表选择具有最佳波长的荧光基团。表中显示了 TPE 激发波长——每项均列出了文献列表。通常,Alexa Fluor® 染料在研究细胞骨架组织或神经元追踪的实验中用作 TPE 的生物偶联物。与抗体偶联的 Qdot® 探针已用于免疫组织化学分析。根据各荧光基团的链接,您还可以找到目前可靶向您目标分子的所有相应生物偶联物;列表范围包括抗体和鬼笔环肽到生长因子和凝集素。如果您在列表中未找到所需的偶联物,链接中还包括活性染料表单或优化的标记试剂盒,您可借此创建自己的生物偶联物探针。

 Alexa Fluor® 350Alexa Fluor® 488Qdot® 525Alexa Fluor® 546Alexa Fluor® 555
靶标标记/偶联物标记/偶联物标记/偶联物标记/偶联物标记/偶联物
参考文献文献列表文献列表文献列表文献列表文献列表
TPE 激发 (nm)720720、830750810810
激光谱线 (nm)350/405488350、488488488
标准滤光片组DAPIFITCFITCTRITCTRITC
激发/发射波长 (nm)346/442490/525350–405/525556/573555/580
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 Alexa Fluor® 568Qdot® 605 探针Alexa Fluor® 594Alexa Fluor® 647Qdot® 655 探针
靶标标记/偶联物标记/偶联物标记/偶联物标记/偶联物标记/偶联物
参考文献文献列表文献列表文献列表文献列表文献列表
TPE 激发 (nm)770750810800750
激光谱线 (nm)561350–594594594/633350–615
标准滤光片组RFPRFPTexas Red®Cy®5Cy®5
激发/发射波长 (nm)578/603350–594/605590/617650/665350–615/655
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 Alexa Fluor® 350Alexa Fluor® 488Qdot® 525Alexa Fluor® 546Alexa Fluor® 555
靶标标记/偶联物标记/偶联物标记/偶联物标记/偶联物标记/偶联物
参考文献文献列表文献列表文献列表文献列表文献列表
TPE 激发 (nm)720720、830750810810
激光谱线 (nm)350/405488350、488488488
标准滤光片组DAPIFITCFITCTRITCTRITC
激发/发射波长 (nm)346/442490/525350–405/525556/573555/580
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 Alexa Fluor® 568Qdot® 605 探针Alexa Fluor® 594Alexa Fluor® 647Qdot® 655 探针
靶标标记/偶联物标记/偶联物标记/偶联物标记/偶联物标记/偶联物
参考文献文献列表文献列表文献列表文献列表文献列表
TPE 激发 (nm)770750810800750
激光谱线 (nm)561350–594594594/633350–615
标准滤光片组RFPRFPTexas Red®Cy®5Cy®5
激发/发射波长 (nm)578/603350–594/605590/617650/665350–615/655
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离子指示剂

Ion Indicators for TPE已有一系列 Molecular Probes® 离子指示剂用于 TPE 应用,主要用于神经元研究。Oregon Green® 488 BAPTA-1 已用于对大鼠脑中的钙信号转导进行成像;fura-2 和 X-rhod-1 已用于浦肯野细胞;Fluo-5F 已在关于树突和树突棘的出版物中得到引用。使用 TPE 进行的其他离子研究包括使用 SBFI 研究大鼠心肌细胞中的钠离子梯度和使用 MQAE 研究嗅觉神经元中的氯离子浓度。

下表显示了在 TPE 中使用的指示剂。您还可以看到按性能标准列出的用于常规成像应用的更多离子指示剂

 Oregon Green® 488 BAPTA-1Fura-2Fluo-5FX-Rhod-1SBFIMQAE
靶标Ca++Ca++Ca++Ca++Na+Cl
参考文献文献列表文献列表文献列表文献列表文献列表文献列表
TPE 激发880780810900760750
激光谱线488350488561350350
标准滤光片组FITCFITCFITCTexas Red® 染料比率比率
激发/发射波长 (nm)494/523340/510494/516580/602340/500350/460
货号O6806F1201F14222X14210S1262E3101

氧化应激检测

TPE 可用于利用多种指示剂检测活性氧的局部释放和细胞的氧化还原状态。具体而言,谷胱甘肽、H2O2 或广义氧化应激可以使用多种探针进行测量,这些探针已被证明适用于 TPE,并提供一系列波长选项。每个探针都包含文献列表和使用的 TPE 激发波长。

下表显示了在 TPE 中使用的指示剂。您还可以看到按性能标准列出的用于常规成像应用的更多活性氧指示剂

 MonochlorobimaneAmplex® RedCM-H2DCFDA
靶标谷胱甘肽H2O2氧化应激
参考文献文献列表文献列表文献列表
TPE 激发 (nm)780750或800740
激光谱线 (nm)350561488
标准滤光片组DAPITRITCFITC
激发/发射波长 (nm)394/490571/585495/597
货号M1381MPA12222C6827

细胞结构探针

TPE 显示良好结果的细胞结构探针包括细胞核染色剂、细胞膜染色剂和细胞示踪染料。细胞核染色剂可用于活细胞 (Hoechst 33342) 和固定 (DAPI) 细胞,两者均发蓝光并具有类似的 TPE 激发波长。细胞膜探针可提供红色(FM® 1-43 染料)或远红外 (DiD) 发射波长选择,细胞示踪染料范围从绿色到橙色。

下表显示了 TPE 中使用的探针,以及文献列表和 TPE 激发波长。您还可以看到按性能标准列出的用于常规成像应用的更多细胞结构探针

 DiDFM® 1-43CFSECellTracker™ 橙色荧光黄DAPIHoechst 33342
靶标细胞膜细胞膜细胞示踪细胞示踪细胞示踪DNADNA
参考文献文献列表文献列表文献列表文献列表文献列表文献列表文献列表
TPE 激发 (nm)817840820820850740740
激光谱线 (nm)594/633488488488405350/405350/405
标准滤光片组Cy®5TRITCFITCTRITCTRITCDAPIDAPI
激发/发射波长 (nm)644/665479/598490/525541/565428/536350/470350/461
货号D7757T3163C1157C2927L453查找产品H3570

仅供科研使用,不可用于诊断目的。