丝氨酸-苏氨酸激酶 Akt（也称为蛋白激酶 B（PKB））在广泛影响的信号网络中起着关键作用。Akt 激活通过下游靶标和相互作用伙伴产生多种细胞内反应，从而成为细胞信号传导通路的主开关。Akt 与癌症、糖尿病和神经变性等多种疾病有关。Akt 是基础研究和药物开发领域研究最活跃的激酶之一。我们提供一系列产品，助力Akt研究。 

Akt/PKB 通路的关键靶标

Akt/PKB 有三种同工型 [1]

AKT1/PKBα μ LAKT2/ PKBβAKT3/PKBγ ö m

Akt/PKB通路中的常见靶标：

4E-BP1GβLPDK1
ARGSK-3βPI3K
ASK-1IκBPIP2
BADIKKPIP3
Β-CTNMDM2PP2A
CASP9mTORPRAS40
CCND1NFATPTEN
eIF2BNFκBRaptor
eIF4Ap110Rheb
eIF4Bp21Rictor
eIF4Ep27RTK
FKBPp53SK6
FoxO1p85TSC1
GATA4PDCD4TSC2

三种同源物均具有氨基端普莱克斯特林同源（PH）结构域、中央丝氨酸-苏氨酸催化结构域以及小羧基端调节结构域。PH 结构域与磷脂酰肌醇-3,4-双磷酸（PIP2）和磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3）结合，后者是 PI3K 的产物。这种结合使 Akt 定位到质膜，在那里它被磷脂酰肌醇依赖性激酶 1（PDK1）磷酸化，磷酸化发生在催化域激活环的 Thr308 位。这种磷酸化导致激活。完全激活需要第二个位点（Ser473）的磷酸化。

mTOR-rictor 复合物（mTORC2）是第二个磷酸化反应的主要激酶，尽管其他激酶如 Ilk（整合素连接激酶）[2, 3]、PDK1 [4, 5]、DNA 依赖性蛋白激酶（DNA-PK）[6, 7] 和 ATM（共济失调毛细血管扩张突变）[8] 也被发现。

Akt/PKB 通路的异常激活或阻断与肿瘤细胞的存活和增殖有关。因此，Akt 通路是抗癌药物研发的一个极具吸引力的靶点 [9]。抑制肿瘤的关键靶点包括PH域富含亮氨酸重复蛋白磷酸酶（PHLPP）、磷酸酶和 Tensin 同源物（PTEN）以及结节性硬化症复合体（TSC）[10]。这些靶点在整个通路中的多个节点上提供抑制作用。PTEN 可去除 PIP3 的磷酸基，阻止 Akt 的激活。PHLPP1/PHLPP2 可负向调节 PI3K，进而调节 Akt [10]。TSC1 和 TSC2 可被 Akt 激活，然后阻碍下游 mTOR [11]。

数据

我们提供针对 Akt 信号传导通路关键靶标的抗体、酶联免疫吸附试验、Luminex 多重检测和生长因子。 

以下为使用赛默飞世尔科技产品的蛋白印迹法、酶联免疫吸附试验和 Luminex 数据。

Western blot analysis of AKT [pS473]

 

通过加载 20 µg NIH/3T3（泳道 1）、用 25 ng/ml PDGF 处理 10 分钟的 NIH/3T3（泳道 2）和 U-87 MG（泳道 3）细胞裂解液，对 AKT [pS473] 进行蛋白印迹分析。将蛋白质转移到硝酸纤维素膜上，并在室温下用 5% 脱脂牛奶封闭 1 小时。使用 ABfinity AKT [pS473] 重组兔单克隆抗体（目录号：700256）在 4°C 摇床平台上，以 2.5% 脱脂牛奶为介质，检测到 AKT [pS473] 的分子量为 55 kDa，浓度为 0.5 µg-1 µg/ml。为了确认特异性，用磷酸化肽（10 µg/mL）进行了竞争反应，如右侧相应印迹所示。使用 1:5000 稀释的羊抗兔IgG-HRP二抗（目录号：G21234），使用 Novex ECL 化学发光底物试剂盒（目录号：WP20005）进行化学发光检测。

Immunofluorescent analysis of AKT (pT308)

对 70% 融合的 log 期 HeLa 细胞进行 AKT（pT308）免疫荧光分析。用 4% 多聚甲醛固定细胞 15 分钟，用 0 透化。 25% Triton X-100 可维持 10 分钟，并在室温下用 5% BSA 封闭 1 小时。细胞用 ABfinity AKT（pT308）重组兔单克隆抗体（目录号：701052）标记，在 1% BSA 中以 1:500 的稀释度孵育 3 小时 ，然后用稀释度为 1:400 的 Alexa Fluor 488 山羊抗兔 IgG 二抗（目录号：A11008）在室温下孵育 30 分钟（图 a：绿色）。用 SlowFade Gold Antifade Mountant DAPI（目录号：S36938）对细胞核（图 b：蓝色）进行染色。F-肌动蛋白（面板 c：红色）用 Alexa Fluor 594 phalloidin（目录号：A12381）染色。面板 d 是显示细胞质和核周定位的磷酸化 AKT（pT308）的合并图像。面板 e 显示与磷酸化 AKT（pT308）肽的竞争。 

参考文献

  1. Vivanco, I., et al.(2002) The phosphatidylinositol 3-kinase AKT pathway in human cancer.Nat Rev Cancer 7: 489-501.
  2. Persad, S., et al.(2000) Inhibition of integrin-linked kinase (ILK) suppresses activation of protein kinase B/Akt and induces cell cycle arrest and apoptosis of PTEN-mutant prostate cancer cells.Proc Natl Acad Sci USA 97: 3207-3212.
  3. Balendram, A., et al.(1999) PDK1 acquires PDK2 activity in the presence of a synthetic peptide derived from the carboxyl terminus of PRK2.Curr Biol 9: 393-404.
  4. Rong, J., Simons, M. (2012) Syndecan 4 regulation of PDK1-dependent Akt activation.Cellular Signaling 25: 101-105.
  5. Feng, et al.(2004) Identification of a PKB/Akt hydrophobic motif Ser-473 kinase as DNA-dependent protein kinase.J Biol Chem 279: 41189-41196.
  6. Yikun, L., et al.(2013) Protein phosphatase 2A and DNA-dependent protein kinase are involved in mediating rapamycin-induced Akt phosphorylation.J Biol Chem 288: 13215-13224.
  7. Dong, L.Q., Liu, F. (2005) PDK2: the mission piece in the receptor tyrosine kinase signaling pathway puzzle.Am J Physiol Endocrinol Metab 289: E187-E196.
  8. Cheng, J.Q., et al.(2005) The Akt/PKB pathway: molecular target for cancer drug discovery.Oncogene 24: 7482-7492.
  9. Newton, A. & Trotman, L. (2014) Turning off AKT: PHLPP as a drug target.Annu Rev Pharmacol Toxicol 54: 537-558.
  10. Hay, N. (2005) The Akt-mTOR tango and its relevance to cancer.Cancer Cell 8: 179-183.

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