showcase.par.63215.image.0.0.1

Northern 印迹杂交分析可提供关于RNA 特性、大小和丰度的信息，从而更深入地了解基因表达水平。我们的Invitrogen™ 产品组合是业界最全面的Northern 印迹分析产品之一。从可制备高品质、完整RNA 的Invitrogen™ TRIzol™试剂，到无RNA 酶试剂和Invitrogen™ BrightStar™-Plus 膜，这些产品可满足您所有的Northern 印迹分析需求，助您缩短获得结果所需的时间。

分子生物基础试剂促销

Northern 印迹杂交分步指南

RNA 分离

获得高品质的完整RNA 是进行Northern 印迹杂交的关键步骤。用于分离RNA 的所有protocol、技术和市售试剂盒都具有以下共同特征：

  • 裂解细胞和破坏膜
  • 核糖核酸酶活性的抑制
  • 脱蛋白
  • 回收完整RNA

 

RNA 分离产品

IS10008iPrep™ PureLink® 病毒试剂盒K156001PureLink® 血液总RNA 试剂盒
AM1934LeukoLOCK™ 总RNA 分离系统12280-050PureLink® 病毒RNA/DNA 小抽试剂盒
AM1840MagMAX™ 总核酸分离试剂盒AM1975RecoverAll™ FFPE 样品总核酸分离试剂盒
AM1839MagMAX™-96微阵列总RNA 分离试剂盒AM1925RiboPure™-细菌/酵母试剂盒
AM1830MagMAX™-96总RNA 分离试剂盒AM1926RiboPure™-酵母试剂盒
AM1936MagMAX™-96病毒RNA 分离试剂盒 AM1928RiboPure™-血液试剂盒
AM1983MELT™总核酸分离系统AM1912RNAqueous® 试剂盒
AM9690植物RNA 分离辅助 AM1931RNAqueous®-微量提取试剂盒
12322012植物RNA 试剂4380204Tempus® Spin RNA 分离试剂盒
12173011APureLink® Pro 96总RNA 纯化试剂盒10296010TRIzol® LS 试剂
122800-96APureLink® Pro 96病毒RNA/DNA 纯化试剂盒16096-020TRIzol® Max™ 细菌/酵母RNA 分离试剂盒
12183016PureLink® RNA 微量提取试剂盒12183555TRIzol® Plus RNA 纯化系统
12183018APureLink® RNA 小抽试剂盒15596026TRIzol® 试剂

 

查看RNA分离试剂选择指南

探针生成

RNA探针可在体外通过使用Invitrogen™ MAXIscript™ 试剂盒转录反应生成。使用该试剂盒进行合成期间，可直接整合同位素或非同位素标记的核苷酸，或者对RNA 进行无标记合成，随后使用补骨脂素-生物素处理，生成用于印迹杂交的生物素化探针。

技术注意事项：
当使用RNA探针而不是DNA 探针进行Northern 印迹分析时，我们建议进行多次调整以获得最佳结果。其中包括：

  • 所用膜的类型
  • 适合RNA 的杂交缓冲液
  • 升高杂交和洗涤温度
  • 探针技术。

 

探针生成产品

AM1308MMAXIscript® SP6试剂盒，附带使用手册
AM1320MMAXIscript® SP6⁄T7试剂盒（每盒15次反应），附带使用手册
AM1316MMAXIscript® T3试剂盒，附带使用手册
AM1312MMAXIscript® T7试剂盒，附带使用手册
AM1324MMAXIscript® T7⁄T3试剂盒（每盒15次反应），附带使用手册

变性

分离出RNA 样品后，Northern 印迹分析的下一步是使琼脂糖凝胶电泳变性。甲醛一直被用作电泳的传统变性剂。Invitrogen™ NorthernMax™ 试剂盒包含一套完整的无RNA 酶试剂，用于含甲醛的琼脂糖凝胶电泳。使用甲醛的缺点在于需要在通风橱内倾倒和电泳。使用Invitrogen™ NorthernMax™-Gly 试剂盒，RNA 样品在乙二醛/ DMSO 中变性，不存在与甲醛有关的安全性问题。

我们提供多种RNA ladders 可用于准确预估mRNA 的分子量大小，包括 Invitrogen™ Millennium™ RNA Markers。查看关于RNA ladders的更多信息。

 

变性产品

AM7785Millennium™ 标记物探针模板75001850x Denhardt’s solution
AM8676NorthernMax® 10X 变性凝胶缓冲液750023UltraPure™ DEPC 处理水
AM8552NorthernMax® 甲醛上样染料（1 mL试管）10977-015UltraPure™ 无DNase/RNase 蒸馏水
AM1940NorthernMax® 试剂盒16550100UltraPure™ 琼脂糖1000
AM8672NorthernMax®1 小时转印缓冲液14476028UltraPure™ 0.5M EDTA, pH 8.0
AM8677NorthernMax® 预杂交/杂交缓冲液24740011UltraPure™ 5M NaCl
AM8678NorthernMax®-Gly 10X 凝胶制备/电泳缓冲液15506017UltraPure™ Tris HCl
AM1946NorthernMax®-Gly 试剂盒15557036UltraPure™ 20X SSC
AM8551NorthernMax®-Gly 样品上样染料（1 mL试管）15591035UltraPure™ 20X SSPE

固相载体转印和固定

完成变性琼脂糖凝胶电泳分离后，将RNA 转印到带正电荷的尼龙膜上并固定，用于后续杂交。为实现快速、可重复的转印，iBlot 干转系统可在7分钟内将RNA完全转印到尼龙膜上。使用干转法时，无需使用其他缓冲液或液体，从而不会对结果造成差异。

此外，我们提供了一种快速的碱性转印方法，其被并入NorthernMax 和NorthernMax-Gly试剂盒。该转印方法代替了过夜转印，只需要2小时即可将RNA（特别是较大的转录物）高效转印到膜上，具有更高的印迹灵敏性。NorthernMax 和NorthernMax-Gly试剂盒经过优化，可与BrightStar Plus 带正电尼龙膜配合使用，它们能够最大限度地降低背景和增强信号。请注意，硝酸纤维素膜与NorthernMax 转印缓冲液在化学上不兼容，不应与这些试剂盒一起使用。

 

固相载体转印和固定产品

AM10100BrightStar-Plus 带正电尼龙膜（15 x 15 cm）
AM10104BrightStar-Plus 带正电尼龙膜（大卷，30 cm x 3 m）
AM10102BrightStar-Plus 带正电尼龙膜（小卷，30 x 45 cm）
15515-025UltraPure™ 甲酰胺
AM9342甲酰胺（去离子）
LC2003Novex 带正电尼龙膜，045微米（8.3 x 7.3 cm）

探针预杂交和杂交

Invitrogen™ NorthernMax™和NorthernMax™-Gly 试剂盒包含ULTRAhyb™ 超灵敏杂交缓冲液，可用于预杂交和杂交。尽管双链DNA 探针在使用前必须变性，但RNA 探针和单链DNA 探针可以用少量的ULTRAhyb™ 缓冲液稀释，然后再加到预杂交印迹中。与其他杂交溶液相比，ULTRAhyb 缓冲液提高杂交完成程度且不增加背景，可将灵敏度提高100倍。至少可以检测到10,000个分子。由于ULTRAhyb 缓冲液最大限度地提高了印迹的灵敏度，所以通常可以在短短2小时内完成许多目标分子的杂交。


探针预杂交和杂交产品

AM8676NorthernMax® 10X 变性凝胶缓冲液
AM8552NorthernMax® 甲醛上样染料（1 ml试管）
AM1940NorthernMax® 试剂盒
AM8672NorthernMax® 1小时转印缓冲液
AM8677NorthernMax® 预杂交/杂交缓冲液
AM8678NorthernMax®-Gly 10X 凝胶制备/电泳缓冲液
AM1946NorthernMax®-Gly 试剂盒
AM8551NorthernMax®-Gly 样品上样染料（1 ml试管）

洗涤

杂交后，使用缓冲液洗涤多次，除去未杂交的探针。低严格度洗涤（如，使用2X SSC或SSPE）可除去杂交溶液和未杂交的探针。高严格度洗涤（如，使用0.1X SSC或SSPE）可除去部分杂交分子。经认证无RNA酶的低和高严格度洗涤缓冲液包含在NorthernMax 试剂盒中，也可单独购买。

 

洗涤产品

AM8677NorthernMax® 预杂交/杂交缓冲液
AM8670ULTRAhyb® 超敏杂交缓冲液， 125 mL
AM8669ULTRAhyb® 超敏杂交缓冲液，4 x 125 mL
AM8663ULTRAhyb®-Oligo

 

 

检测

BrightStar™ BioDetect™ 非同位素检测试剂盒为检测生物素化RNA 和DNA 探针提供了所有所需试剂和材料。NorthernMax 试剂盒NorthernMax 试剂盒经过优化，可与BrightStar BioDetect 试剂盒一起使用，用于超灵敏非同位素Northern 印迹，具有高信噪比和低背景。这种优化的Northern 印迹法也可以获得出色的放射性标记探针检测结果。


检测产品

AM1930BrightStar® BioDetect™ Kit
Step 1 : RNA 分离

RNA 分离

获得高品质的完整RNA 是进行Northern 印迹杂交的关键步骤。用于分离RNA 的所有protocol、技术和市售试剂盒都具有以下共同特征：

  • 裂解细胞和破坏膜
  • 核糖核酸酶活性的抑制
  • 脱蛋白
  • 回收完整RNA

 

RNA 分离产品

IS10008iPrep™ PureLink® 病毒试剂盒K156001PureLink® 血液总RNA 试剂盒
AM1934LeukoLOCK™ 总RNA 分离系统12280-050PureLink® 病毒RNA/DNA 小抽试剂盒
AM1840MagMAX™ 总核酸分离试剂盒AM1975RecoverAll™ FFPE 样品总核酸分离试剂盒
AM1839MagMAX™-96微阵列总RNA 分离试剂盒AM1925RiboPure™-细菌/酵母试剂盒
AM1830MagMAX™-96总RNA 分离试剂盒AM1926RiboPure™-酵母试剂盒
AM1936MagMAX™-96病毒RNA 分离试剂盒 AM1928RiboPure™-血液试剂盒
AM1983MELT™总核酸分离系统AM1912RNAqueous® 试剂盒
AM9690植物RNA 分离辅助 AM1931RNAqueous®-微量提取试剂盒
12322012植物RNA 试剂4380204Tempus® Spin RNA 分离试剂盒
12173011APureLink® Pro 96总RNA 纯化试剂盒10296010TRIzol® LS 试剂
122800-96APureLink® Pro 96病毒RNA/DNA 纯化试剂盒16096-020TRIzol® Max™ 细菌/酵母RNA 分离试剂盒
12183016PureLink® RNA 微量提取试剂盒12183555TRIzol® Plus RNA 纯化系统
12183018APureLink® RNA 小抽试剂盒15596026TRIzol® 试剂

 

查看RNA分离试剂选择指南

Step 2 : 探针生成

探针生成

RNA探针可在体外通过使用Invitrogen™ MAXIscript™ 试剂盒转录反应生成。使用该试剂盒进行合成期间，可直接整合同位素或非同位素标记的核苷酸，或者对RNA 进行无标记合成，随后使用补骨脂素-生物素处理，生成用于印迹杂交的生物素化探针。

技术注意事项：
当使用RNA探针而不是DNA 探针进行Northern 印迹分析时，我们建议进行多次调整以获得最佳结果。其中包括：

  • 所用膜的类型
  • 适合RNA 的杂交缓冲液
  • 升高杂交和洗涤温度
  • 探针技术。

 

探针生成产品

AM1308MMAXIscript® SP6试剂盒，附带使用手册
AM1320MMAXIscript® SP6⁄T7试剂盒（每盒15次反应），附带使用手册
AM1316MMAXIscript® T3试剂盒，附带使用手册
AM1312MMAXIscript® T7试剂盒，附带使用手册
AM1324MMAXIscript® T7⁄T3试剂盒（每盒15次反应），附带使用手册
Step 3 : 变性

变性

分离出RNA 样品后，Northern 印迹分析的下一步是使琼脂糖凝胶电泳变性。甲醛一直被用作电泳的传统变性剂。Invitrogen™ NorthernMax™ 试剂盒包含一套完整的无RNA 酶试剂，用于含甲醛的琼脂糖凝胶电泳。使用甲醛的缺点在于需要在通风橱内倾倒和电泳。使用Invitrogen™ NorthernMax™-Gly 试剂盒，RNA 样品在乙二醛/ DMSO 中变性，不存在与甲醛有关的安全性问题。

我们提供多种RNA ladders 可用于准确预估mRNA 的分子量大小，包括 Invitrogen™ Millennium™ RNA Markers。查看关于RNA ladders的更多信息。

 

变性产品

AM7785Millennium™ 标记物探针模板75001850x Denhardt’s solution
AM8676NorthernMax® 10X 变性凝胶缓冲液750023UltraPure™ DEPC 处理水
AM8552NorthernMax® 甲醛上样染料（1 mL试管）10977-015UltraPure™ 无DNase/RNase 蒸馏水
AM1940NorthernMax® 试剂盒16550100UltraPure™ 琼脂糖1000
AM8672NorthernMax®1 小时转印缓冲液14476028UltraPure™ 0.5M EDTA, pH 8.0
AM8677NorthernMax® 预杂交/杂交缓冲液24740011UltraPure™ 5M NaCl
AM8678NorthernMax®-Gly 10X 凝胶制备/电泳缓冲液15506017UltraPure™ Tris HCl
AM1946NorthernMax®-Gly 试剂盒15557036UltraPure™ 20X SSC
AM8551NorthernMax®-Gly 样品上样染料（1 mL试管）15591035UltraPure™ 20X SSPE
Step 4 : 转印

固相载体转印和固定

完成变性琼脂糖凝胶电泳分离后，将RNA 转印到带正电荷的尼龙膜上并固定，用于后续杂交。为实现快速、可重复的转印，iBlot 干转系统可在7分钟内将RNA完全转印到尼龙膜上。使用干转法时，无需使用其他缓冲液或液体，从而不会对结果造成差异。

此外，我们提供了一种快速的碱性转印方法，其被并入NorthernMax 和NorthernMax-Gly试剂盒。该转印方法代替了过夜转印，只需要2小时即可将RNA（特别是较大的转录物）高效转印到膜上，具有更高的印迹灵敏性。NorthernMax 和NorthernMax-Gly试剂盒经过优化，可与BrightStar Plus 带正电尼龙膜配合使用，它们能够最大限度地降低背景和增强信号。请注意，硝酸纤维素膜与NorthernMax 转印缓冲液在化学上不兼容，不应与这些试剂盒一起使用。

 

固相载体转印和固定产品

AM10100BrightStar-Plus 带正电尼龙膜（15 x 15 cm）
AM10104BrightStar-Plus 带正电尼龙膜（大卷，30 cm x 3 m）
AM10102BrightStar-Plus 带正电尼龙膜（小卷，30 x 45 cm）
15515-025UltraPure™ 甲酰胺
AM9342甲酰胺（去离子）
LC2003Novex 带正电尼龙膜，045微米（8.3 x 7.3 cm）
Step 5 : 杂交

探针预杂交和杂交

Invitrogen™ NorthernMax™和NorthernMax™-Gly 试剂盒包含ULTRAhyb™ 超灵敏杂交缓冲液，可用于预杂交和杂交。尽管双链DNA 探针在使用前必须变性，但RNA 探针和单链DNA 探针可以用少量的ULTRAhyb™ 缓冲液稀释，然后再加到预杂交印迹中。与其他杂交溶液相比，ULTRAhyb 缓冲液提高杂交完成程度且不增加背景，可将灵敏度提高100倍。至少可以检测到10,000个分子。由于ULTRAhyb 缓冲液最大限度地提高了印迹的灵敏度，所以通常可以在短短2小时内完成许多目标分子的杂交。


探针预杂交和杂交产品

AM8676NorthernMax® 10X 变性凝胶缓冲液
AM8552NorthernMax® 甲醛上样染料（1 ml试管）
AM1940NorthernMax® 试剂盒
AM8672NorthernMax® 1小时转印缓冲液
AM8677NorthernMax® 预杂交/杂交缓冲液
AM8678NorthernMax®-Gly 10X 凝胶制备/电泳缓冲液
AM1946NorthernMax®-Gly 试剂盒
AM8551NorthernMax®-Gly 样品上样染料（1 ml试管）
Step 6 : 洗涤和检测

洗涤

杂交后，使用缓冲液洗涤多次，除去未杂交的探针。低严格度洗涤（如，使用2X SSC或SSPE）可除去杂交溶液和未杂交的探针。高严格度洗涤（如，使用0.1X SSC或SSPE）可除去部分杂交分子。经认证无RNA酶的低和高严格度洗涤缓冲液包含在NorthernMax 试剂盒中，也可单独购买。

 

洗涤产品

AM8677NorthernMax® 预杂交/杂交缓冲液
AM8670ULTRAhyb® 超敏杂交缓冲液， 125 mL
AM8669ULTRAhyb® 超敏杂交缓冲液，4 x 125 mL
AM8663ULTRAhyb®-Oligo

 

 

检测

BrightStar™ BioDetect™ 非同位素检测试剂盒为检测生物素化RNA 和DNA 探针提供了所有所需试剂和材料。NorthernMax 试剂盒NorthernMax 试剂盒经过优化，可与BrightStar BioDetect 试剂盒一起使用，用于超灵敏非同位素Northern 印迹，具有高信噪比和低背景。这种优化的Northern 印迹法也可以获得出色的放射性标记探针检测结果。


检测产品

AM1930BrightStar® BioDetect™ Kit

无缓冲液的干式转印

 

iBlot 干转系统

  • 节省时间—通常可在7分钟内完成DNA 或RNA 转印
  • 可重复—一致的制备和运行条件
  • 方便—无需繁琐的缓冲液制备过程

了解更多

技术说明

  • 技术说明14(2)：Northern杂交分析：使用ULTRAhyb 技术从印迹中获取更多信息：我们证明通过选择更灵敏的杂交缓冲液，可以显着增加Northern 印迹上与探针杂交的目标分子百分比。

仅供研究使用。不可用于诊断程序。