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AAV 生产流程
AAV基因治疗商业化制造解决方案
人们对基因治疗越来越感兴趣，这就更需要提供一个更具成本效益和可扩展性的病毒载体制造平台来开发该治疗方案。腺相关病毒已经成为可选择的载体，因为它具有显著的安全性，感染该载体不会致病。此外，AAV不能自行复制，也不能直接整合到宿主基因组中。
Thermo Fisher Scientific 提供 创新型产品和服务，旨在通过AAV载体开发加速基因治疗项目。凭借覆盖整个AAV生产流程的解决方案，我们的目标是提供卓越的产品和专业知识，帮助企业开发突破性疗法。
AAV工作流程
监管AAV载体的开发有多种策略，但一般步骤包括质粒开发和生产、细胞扩增、质粒转染、病毒载体生产、纯化以及填充 和完成。在贴壁或悬浮细胞系中产生AAV的瞬时转染策略在临床前和早期发育阶段最为常见。AAV生产的另一种选择是开发稳定的生产细胞系，这有助于确保病毒载体的长期稳定供应。
使用哺乳动物细胞系进行生产，例如HEK293细胞， 需要用转染试剂将多个质粒转染到细胞中。当 Sf9 细胞用于生产时，目的基因通过杆状病毒表达载体系统引入。这两种选择都需要中等规模到大规模的质粒生产。
我们为您的AAV制造流程的每个阶段提供解决方案和专业知识
质粒开发和生产
工作流程的第一步是产生大量质粒 DNA，然后将其转染到宿主细胞中用于AAV生产。 细菌表达后，从发酵培养物中收获并纯化质粒 DNA。为供临床使用，需进行安全性测试，从而帮助确保质粒 DNA 不含任何与工艺或产品相关的杂质。
质粒生产产品
基因合成和克隆服务
Invitrogen GeneArt 基因合成服务包括几乎任何遗传序列的化学合成、克隆和序列验证。您将收到穿刺菌和 / 或含有合成基因的纯化质粒 - 可立即用于下游应用领域。
cGMP plasmid manufacturing services
Patheon plasmid services for plasmid process development, QC and analytical methods, and up to 3,000L cGMP plasmid manufacturing.
细胞扩增、质粒转染和病毒载体生产
在进行转染之前，选择并扩增合适的哺乳动物或昆虫细胞系。在大规模生产中，可以悬浮生长的细胞，如悬浮适应的HEK293或Sf9昆虫细胞，比贴壁细胞具有优势，因为它们更容易扩展。尽管如此，贴壁HEK293培养系统很容易建立，并经常用于工艺开发阶段或较容易扩展的工艺。
一旦细胞扩增，目的基因被引入，病毒载体生产就开始了。无论采用何种生产规模或细胞系统，我们都能为您的上游AAV生产流程提供最先进的产品。
细胞培养平台—贴壁细胞
- 细胞工厂系统和液体转移组件
- 微载体和 Thermo Scientific Harvestainer 生物工艺容器
- Thermo Scientific HyPerforma SUB（一次性生物反应器）
- 血清
细胞培养平台—悬浮细胞
核酸纯化
经过若干天生产，AAV载体已准备好收获和纯化。在满足所有法规要求后，产品就可以进行最终填充、包装和完成了。
下游加工可能是一个费力且昂贵的过程，因此开发有效且可扩展产生高纯度和高产率的AAV颗粒的方法至关重要。
对于大规模生产而言，从上游工艺中产生的各种工艺和产品相关杂质中分离病毒载体且符合cGMP标准的纯化技术至关重要。亲和色谱在单一步骤中具有高纯度和高收率的特点，可以减少AAV纯化过程步骤，从而提高收率并减少工艺制备时间。
需要抛光色谱步骤来富集完整的衣壳。空粒子和满粒子之间的等电点 (pI) 只有微小的差异。希望用高分辨率树脂进行离子交换层析，以确保空衣壳和完整衣壳的分离。
POROS CaptureSelect AAV 亲和树脂，专为纯化不同 AAV 血清亚型而设计，为行业提供一个可扩展的平台。此外，高分辨率POROS树脂能够提供出色的抛光解决方案。
色谱树脂
混合器、缓冲液和一次性解决方案
填充和完成
最终产品经过纯化，成功通过污染物和杂质测试，并获得临床使用监管批准后，就可以进行配制、最终填充和完成。赛默飞世尔有能力提供药品填充、完成、储存和交付服务。如果客户喜欢独立进行填充和完成，我们提供一系列用于治疗的无菌容器系统，包括生物处理容器和包装袋。我们提供适合您独特AAV应用和工作流程的解决方案。
质粒开发和生产
工作流程的第一步是产生大量质粒 DNA，然后将其转染到宿主细胞中用于AAV生产。 细菌表达后，从发酵培养物中收获并纯化质粒 DNA。为供临床使用，需进行安全性测试，从而帮助确保质粒 DNA 不含任何与工艺或产品相关的杂质。
质粒生产产品
基因合成和克隆服务
Invitrogen GeneArt 基因合成服务包括几乎任何遗传序列的化学合成、克隆和序列验证。您将收到穿刺菌和 / 或含有合成基因的纯化质粒 - 可立即用于下游应用领域。
cGMP plasmid manufacturing services
Patheon plasmid services for plasmid process development, QC and analytical methods, and up to 3,000L cGMP plasmid manufacturing.
细胞扩增、质粒转染和病毒载体生产
在进行转染之前，选择并扩增合适的哺乳动物或昆虫细胞系。在大规模生产中，可以悬浮生长的细胞，如悬浮适应的HEK293或Sf9昆虫细胞，比贴壁细胞具有优势，因为它们更容易扩展。尽管如此，贴壁HEK293培养系统很容易建立，并经常用于工艺开发阶段或较容易扩展的工艺。
一旦细胞扩增，目的基因被引入，病毒载体生产就开始了。无论采用何种生产规模或细胞系统，我们都能为您的上游AAV生产流程提供最先进的产品。
细胞培养平台—贴壁细胞
- 细胞工厂系统和液体转移组件
- 微载体和 Thermo Scientific Harvestainer 生物工艺容器
- Thermo Scientific HyPerforma SUB（一次性生物反应器）
- 血清
细胞培养平台—悬浮细胞
核酸纯化
经过若干天生产，AAV载体已准备好收获和纯化。在满足所有法规要求后，产品就可以进行最终填充、包装和完成了。
下游加工可能是一个费力且昂贵的过程，因此开发有效且可扩展产生高纯度和高产率的AAV颗粒的方法至关重要。
对于大规模生产而言，从上游工艺中产生的各种工艺和产品相关杂质中分离病毒载体且符合cGMP标准的纯化技术至关重要。亲和色谱在单一步骤中具有高纯度和高收率的特点，可以减少AAV纯化过程步骤，从而提高收率并减少工艺制备时间。
需要抛光色谱步骤来富集完整的衣壳。空粒子和满粒子之间的等电点 (pI) 只有微小的差异。希望用高分辨率树脂进行离子交换层析，以确保空衣壳和完整衣壳的分离。
POROS CaptureSelect AAV 亲和树脂，专为纯化不同 AAV 血清亚型而设计，为行业提供一个可扩展的平台。此外，高分辨率POROS树脂能够提供出色的抛光解决方案。
色谱树脂
混合器、缓冲液和一次性解决方案
填充和完成
最终产品经过纯化，成功通过污染物和杂质测试，并获得临床使用监管批准后，就可以进行配制、最终填充和完成。赛默飞世尔有能力提供药品填充、完成、储存和交付服务。如果客户喜欢独立进行填充和完成，我们提供一系列用于治疗的无菌容器系统，包括生物处理容器和包装袋。我们提供适合您独特AAV应用和工作流程的解决方案。
分析：污染物和杂质质量控制测试
为了确保最终 AAV 产品获得监管批准，必须开展质量控制测试。我们为AAV生产流程的污染物和杂质测试提供快速分子测试方法。
基于细胞培养疗法的支原体检测
根据监管要求，基于细胞培养的疗法必须不含支原体。在传统上，制造商通常将测试外包给专门从事28天培养测试方法的实验 室。对于基因和细胞治疗产品以及其他低剂量和短保存期疗法的制造商来说，等待28天才能获得测试结果是不可行的。基于实时聚合酶链反应的检测为基于培养的方法提供了一种可行的替代方法，在满足灵敏度要求的同时能够在数小时内提供结果。
基于细胞培养的疗法的残留宿主细胞 DNA 检测
对来自生产细胞系的残留宿主细胞DNA进行定量是Thermo Fisher Scientific基因治疗产品纯度测试的一部分。监管机构就每剂载体的最大可接受DNA水平提供指导。因此，快速准确的量化对制造商至关重要。基因治疗产品和其他低剂量、短保存期疗法不适合需要很长时间才能获得结果并使用大量样品的测试。基于实时 PCR 的检测可在数小时内提供准确、可行的结果，同时满足灵敏度要求。
卡那霉素抗性质粒的残余质粒 DNA 定量，用于基于细胞培养的疗法的测试
我们的 resDNASEQ 定量质粒 DNA 溶液可用于通过靶向多个等位基因家族来定量所有常见的卡那霉素抗性质粒。获得可重现、快速和准确的定量，同时满足监管机构规定的灵敏度要求。
细胞培养疗法中Sf-弹状病毒的定量
监管机构希望所有生物制品都经过病毒检测，以降低病毒污染的风险。重要的是要有一种准确的方法来定量Sf-弹状病毒，这是一种已知的传染性污染物，通常发现于基因治疗和疫苗开发中使用的Sf9/Sf21细胞。通过试剂盒中检测Sf-弹状病毒时，获得您所需的可重现准确性，试剂盒是旨在减轻生物制品检测挑战的整体工作流程解决方案的一部分。
病毒载体合同开发
我们的病毒载体合同制造服务支持从药物开发到临床试验再到全面制造向客户提供全方位支持。凭借在cGMP制造实践方面的专业知识，我们的团队对科学家和客户在该领域面临的挑战有着深刻的理解。我们提供将新型基因疗法推向市场所需的技术专业知识和操作能力。
除了产品发布、稳定性测试、工艺和分析鉴定，我们还提供全球质量合规和监管支持。
资源
支持
仅供科研使用，不可用于诊断目的。