培养细胞时会遇到几个常见问题。原代培养与所建细胞系中的相同问题可能有不同的原因。

下表讨论了培养细胞时遇到的一些常见问题及其可能的原因和建议解决方案。

问题可能的原因建议解决方案
培养基 pH 值快速变化二氧化碳 (CO2) 张力不正确根据培养基中碳酸氢钠浓度，增加或降低培养箱中 CO2 百分比。

碳酸氢钠浓度为 2.0 至 3.7 g/L 时，相应的CO2 用量为 5% 至 10%。 换用 CO2 非依赖性培养基。
 组织培养瓶的瓶盖过紧松开瓶盖四分之一圈。

碳酸氢盐缓冲不足添加 HEPES 缓冲液，使其最终浓度为 10-25 mM。
 培养基中用盐不正确在 CO2 环境中使用基于 Earle 盐的培养基，而在大气条件下使用基于 Hanks 盐的培养基。
 细菌、酵母菌或真菌污染丢弃培养物和培养基。

尝试净化培养物。 （请参阅“使用抗生素和抗真菌剂净化培养物”。）
培养基中有沉淀物，pH 值无变化去污剂洗涤后有残留的磷酸盐，可能会使干粉培养基组分发生沉淀用去离子蒸馏水多次冲洗玻璃器皿，然后灭菌。


 冷冻培养基加热培养基至 37°C，并搅拌以促进溶解。 如果仍有沉淀物，应丢弃培养基。
培养基中有沉淀物，pH 值变化
细菌或真菌污染
丢弃培养基。

尝试净化培养物。 （请参阅“使用
抗生素和抗真菌剂净化培养物”。）
细胞未黏附到培养容器上
细胞胰蛋白酶化过度缩短胰蛋白酶化时间，或减少胰蛋白酶用量。 （请参见“从
培养容器上解离细胞”。）
 支原体污染分离培养物，并检测是否存在支原体感染。 清洁通风罩和培养箱。如果培养物被污染，应丢弃。
 培养基中没有贴壁因子对于无血清配方，确保其含有贴壁因子。
培养物生长减慢
培养基或血清发生变化
比较培养基配方，了解其在葡萄糖、氨基酸及其他组分方面的差异。

在生长实验中比较旧批次血清与新批次血清。

增加初始细胞接种物。

让细胞依次适应新的培养基。

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