搭配使用 AlgiMatrix 紧固缓冲液与24孔和96孔 AlgiMatrix 3D 培养系统微孔板

此页面包含搭配使用 AlgiMatrix 紧固缓冲液与24孔和96孔 AlgiMatrix 3D 培养系统微孔板的实验方案。本实验方案中将讨论以下产品，每种产品均单独销售，也可在"订购信息"下获取：

描述

AlgiMatrix 3D 培养系统是一种非动物源性生物支架（海绵），可促进三维 (3D) 细胞培养。AlgiMatrix 海绵以板-孔形式提供。AlgiMatrix 紧固缓冲液是一种等渗中性 pH 缓冲溶液，专为增强生物支架的硬度而设计。硬度较高的海绵较不容易受到细胞和环境力量引起的微孔扩张和收缩，还容易使用无菌镊子进行夹取和操作。这样可以将海绵转移到不同的孔中，或将海绵倒置以接种或观察海绵两侧的细胞。

紧固缓冲液使用指南

对于硬度较高的海绵，在将细胞添加到海绵之前向细胞和培养基中添加 AlgiMatrix 紧固缓冲液。或者，对于需要较低钙水平的细胞培养应用，您可以先使用紧固缓冲液重新水化海绵，然后再添加细胞和培养基。请参见以下分步实验方案。

建议的紧固缓冲液浓度

用于一般用途时，我们建议溶液中的紧固缓冲液浓度为 10%。用于硬度较高的 AlgiMatrix 海绵时，紧固缓冲液浓度可提高至 50%。较低的紧固缓冲液浓度会导致海绵变软并具有更好光学清晰度。

建议的紧固缓冲液体积

每份 AlgiMatrix 海绵所需的细胞和紧固缓冲液的体积因微孔板的孔尺寸而异：

• 96孔板：对于每份海绵，制备 100 μl 含细胞和紧固缓冲液的培养基。例如，对于浓度为 10% 的紧固缓冲液，在 90 μl 含细胞的培养基中加入 10 μl 紧固缓冲液。
• 24孔板：对于每份海绵，制备 500 μl 含细胞和紧固缓冲液的培养基。例如，对于浓度为 10% 的紧固缓冲液，在 450 μl 含细胞的培养基中加入 50 μl 紧固缓冲液。

要使用 AlgiMatrix 紧固缓冲液：

1. 将细胞重悬于标准细胞培养基中，然后向此悬液中加入 10% AlgiMatrix 紧固缓冲液（例如向 90 μl 含细胞的培养基中添加 10 μl 紧固缓冲液）。最佳的最终细胞浓度因细胞类型而异，但通常 1 × 10⁶ 个细胞/ml 是可靠的目标浓度。虽然 10% 紧固缓冲液浓度可实现海绵透明度与硬度之间的最佳平衡，但某些应用可能在优化此配方后才会获益（参见上文指南）。
2. 从包装中取出 AlgiMatrix 3D 培养系统微孔板并丢弃干燥剂。
3. 96孔板：用移液器将 100 μl 包含紧固缓冲液的细胞悬液接种到每份干燥海绵顶部。24孔板：用移液器将 500 μl 包含紧固缓冲液的细胞悬液接种到每份干燥海绵顶部。备注：海绵将变湿润和半透明。基质中可能会出现气泡；它们会随时间变化而减少或消失。如果海绵内部或下方出现大气泡，请使用移液器吸头朝孔板底部轻轻推动海绵来释放气泡。
4. 重新水化后约5分钟，海绵应呈现为泡沫状，表面干燥或潮湿。
5. 96孔板：用移液器将 100 μl 不含紧固缓冲液的培养基添加到每份海绵顶部。24孔板：用移液器将 500 μl 不含紧固缓冲液的培养基添加到每份海绵顶部。
6. 在培养箱中孵育孔板（在含 4%–6% CO₂ 的 36–38°C 潮湿空气环境中）。如果使用多块微孔板，请勿堆叠。备注：要观察 AlgiMatrix 海绵内部或顶部的细胞，请减小培养基体积或将海绵迁移到干燥的孔中。可以倒置海绵，以便更好地观察海绵顶部的细胞。
7. 根据细胞增殖情况或当培养基开始变色时更换培养基。备注：移除用后培养基时，切勿让抽吸式移液器吸头接触海绵。将吸头与孔壁保持一定角度，并用另一个移液器吸头挡住该吸头，以避免吸入海绵（参见右侧图片）。如果海绵卡在抽吸器中，请立即停止吸入并释放海绵，然后轻轻再次尝试。如果海绵被部分吸入，请勿使用该孔进行定量测定。
8. 几天后，从培养箱中取出孔板并在光学显微镜（低倍）下检查是否形成球状体。

AlgiMatrix 紧固缓冲液含有高钙水平。如果特定细胞培养应用需要更低钙水平的环境，请修改培养方案的前几个步骤，如下所述：

1. 将包含紧固缓冲液的细胞培养基添加到没有细胞的 AlgiMatrix 海绵上。
2. 重新水化约5分钟。
3. 可选：如果您在细胞接种培养基中使用高浓度紧固缓冲液（例如 50%），则使用不含紧固缓冲液的培养基冲洗海绵一次。
4. 将标准培养基（不含紧固缓冲液）中的细胞接种到海绵上，然后继续孵育。

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